实验所用试剂设备清单

货号	产品名称
19292ES	MolPure® Plant Plus RNA Kit 多糖多酚植物 RNA提取试剂盒
—	β-巯基乙醇
—	无水乙醇

 

实验前准备

1．自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，RNase-free离心管，β-巯基乙醇、无水乙醇等。

2．首次使用前，在1 mL裂解液LB*中加入20 μL β-巯基乙醇。

3．首次使用前，在结合液BD*瓶中加入指定体积的无水乙醇（以50 T规格为例，24 mL结合液BD*需加入30 mL无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持结合液BD*中的乙醇含量。

4．首次使用前，在漂洗液W*瓶中加入指定体积的无水乙醇（以50 T规格为例，24 mL漂洗液W*需加入60 mL无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。每次使用后将瓶盖盖紧，以保持漂洗液W*中的乙醇含量。

 

操作步骤

1．按照样本数量，将裂解液LB 500 μL和β-巯基乙醇（自备）10 μL混合配制成一份作用缓冲液，共8份。将配制后的作用缓冲液分装至1.5 mL RNase-free离心管中，待用。

2．取剪碎处理的采摘2天的碧螺春芽尖组织用液氮研磨至细粉状。

3．迅速转移50 mg细粉至装有作用缓冲液的RNase-free离心管中，立即涡旋振荡1 min，室温放置5 min。

4．加入100 μL缓冲液HB，轻柔混匀。

5．12,000 rpm离心5 min，小心吸取上清至新的1.5 mL RNase-free离心管中。

6．将DNA去除柱套入2 mL收集管中，备用。

7．加入上述裂解混合物至DNA去除柱中，12,000 rpm离心5 min，保留滤过液。

8．小心将滤过液中的上清液450 μL转移至新的2 mL RNase-free离心管（自备）中，加入675 μL结合液BD*，轻柔混匀。

9．将上述混合液全部加入RNA吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，弃掉滤过液。

10．加入500 μL去蛋白液PL，12,000 rpm离心1 min，弃废液。

11．加入700 μL无水乙醇（自备），12,000 rpm离心1 min，弃废液。

12．将RNA吸附柱放回收集管，加入700 µL漂洗液W*，12,000 rpm离心1 min，弃废液。【注】：确保漂洗液W*已添加无水乙醇。重复一遍。

13．将RNA吸附柱放回收集管，空柱12,000 rpm离心2 min，以除去残留的漂洗液W*。

14．将RNA吸附柱放入新的1.5 mL RNase-free离心管中，在吸附柱中央加入50 µL RNase-free H2O，室温放置2 min。然后12,000 rpm 离心1 min。收集滤液，即为RNA溶液。

 

质检结果—RNA浓度和纯度

 

质检结果—RNA完整度分析

 

数据来源：武汉某高校老师

 

实验结论

采用翌圣生物离心柱法多糖多酚植物RNA提取试剂盒（19292ES）提取8个茶叶样本，因为茶叶采摘2天，室温保存，RNA存在稍微降解；通过Nanodrop检测RNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整度，结果显示：提取的茶叶RNA浓度高，纯度好，虽然有少许降解，但是3条带完整；能够满足后续RNA-seq的要求。