实验所用试剂设备清单

货号	产品名称
18701ES	MolPure® Blood/Cell/Tissue/Bacteria DNA fast Kit 通用全血/细胞/组织/细菌DNA快速提取试剂盒
10406ES	RNase A 核糖核酸酶A（100 mg/mL）
—	无水乙醇

 

实验前准备

1.需要自备乙醇，异丙醇，1×PBS，RNaseA。

2.开始实验前将需要的水浴先预热到70°C备用。

3. 第一次使用前请先在去蛋白液PL中加入指定量无水乙醇；漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入。 

 

操作步骤

1. 取2mL 培养菌液，10000rpm，离心30s，尽可能的吸弃上清， 收集菌体。

2. 加入200 μL1×PBS重悬，10000rpm离心30s，吸弃上清。将细胞振荡或者吹打充分重悬于 180 μL1×PBS中。

3. 加入20 μL蛋白酶K溶液，充分混匀，再加入200 μL结合液BD，立刻涡旋振荡充分混匀，在 70°C 放置10min。 可选做步骤：如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入200 μL 结合液BD 前加5 μL 100 mg/mL RNaseA 溶液，振荡混匀，室温放置5-10min。

4. 冷却后加100 μL 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。

5. 将上一步混合物加入一个吸附柱AC中，13000rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液。

6. 加入500 μL去蛋白液PL（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm 离心30s，弃废液。

7. 加入600 μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm 离心30s，弃废液。

8. 重复步骤7一遍。

9. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm 离心2min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇 抑制下游反应。

10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100 μL洗脱缓冲液EB， 室温放置3-5min，13,000rpm 离心1min。

11. DNA可以存放在-20°C，如果要长时间存放，可以放置在-70°C。

 

质检结果—DNA浓度和纯度

样本序号	浓度（nanodrop）ng/μL	A260/A280	A260/A230
1	369.717	2.07	2.07
2	391.245	2.08	2.10
3	341.846	2.10	2.11
4	382.898	2.05	2.03

 

质检结果—DNA完整度分析

数据来源：中国海洋大学

实验结论

采用翌圣生物离心柱法大肠杆菌细胞DNA提取试剂盒（18701ES）提取4个大肠杆菌样本，通过Nanodrop检测DNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整度，结果显示：提取的DNA浓度满足预期要求、 、完整度好，无明显降解和拖带，满足后续实验需求。