离心柱 | 法沙土DNA提取
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2026-04-10
实验所用试剂设备清单
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货号 |
产品名称 |
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18815ES |
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— |
无水乙醇 |
实验前准备
1．自备设备和试剂：台式离心机、振荡仪、水浴锅或金属浴，无水乙醇，离心管等。
2．首次使用前，在缓冲液RS*（18815-F）瓶中加入2倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。
3．首次使用前，在漂洗液W*（18815-I）瓶中加入4倍体积的无水乙醇，充分混匀后使用，并做好标记。
操作步骤
1．取500 mg沙土样本至研磨管S1中。
2．加入980 µL缓冲液SP，轻柔涡旋混匀。
3．加入120 μL裂解液LB。
4．将研磨管S1置于研磨仪中，40 Hz处理40 sec。
5．12000 rpm离心5 min，沉淀碎片颗粒。
6．转移上清液至2 mL离心管中。加入250 μL去蛋白液PL，手动晃动10次混匀。4℃放置5 min。
7．12000 rpm室温离心3 min，之后取600 μL上清液，转移至2 mL离心管中。
8．加入200 μL结合液BD，轻柔涡旋混匀。4℃放置5 min。
9．12000 rpm室温离心1 min。转移上清液至5 mL离心管中。
10．加入1050 μL缓冲液RS*，立即吹打混匀。
11．将DNA吸附柱套入2mL收集管中，备用。
12．将预处理混合液加入到DNA吸附柱中，12000 rpm室温离心1 min，弃掉废液。将DNA吸附柱放回收集管，加入600 µL漂洗液W*，12000 rpm室温离心30 sec，弃废液。重复一遍。
13．将DNA吸附柱放回收集管，空柱12000 rpm室温离心2 min，以除去残留的漂洗液W*。
14．将DNA吸附柱放入新的洁净1.5 mL离心管中，在滤膜中央加入50 µL洗脱液，室温放置3min。然后12000 rpm离心1 min，收集滤液即为样本DNA。
15．样品DNA可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。
质检结果—DNA浓度和纯度
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样本序号 |
Nanodrop （ng/μL） |
A260/A280 |
A260/A230 |
Qubit（ng/μL） |
|
1 |
29.734 |
1.74 |
0.5 |
7.42 |
|
2 |
9.927 |
1.91 |
0.68 |
5.38 |
|
3 |
13.163 |
1.81 |
0.67 |
6.78 |
|
4 |
11.282 |
1.69 |
0.85 |
7.36 |
|
5 |
11.432 |
1.81 |
0.72 |
6.04 |
|
6 |
12.290 |
1.81 |
0.69 |
6.34 |
|
7 |
9.730 |
1.8 |
0.61 |
4.96 |
|
8 |
10.504 |
1.73 |
0.78 |
6.20 |
|
9 |
10.363 |
1.77 |
0.67 |
5.76 |
|
10 |
14.271 |
1.82 |
0.79 |
7.38 |
|
11 |
12.483 |
1.83 |
0.63 |
6.40 |
|
12 |
11.536 |
1.79 |
0.69 |
6.08 |
|
13 |
8.641 |
1.61 |
0.64 |
5.34 |
|
14 |
15.089 |
1.76 |
0.59 |
8.62 |
|
15 |
13.343 |
1.78 |
0.73 |
7.54 |
|
16 |
11.822 |
1.75 |
0.62 |
6.02 |
质检结果—DNA完整度分析
数据来源：武汉某高校老师
实验结论
采用翌圣生物离心柱法土壤DNA提取试剂盒（18815ES）提取16个土壤样本，通过Nanodrop检测DNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整度，结果显示：沙土中微生物含量低，但是18815ES可以完全提取沙土中微生物DNA，电泳图中无蛋白残留、无RNA残留，提取的产量可以满足下游16S鉴定的需求。
