巨噬细胞清除 | 第九课：睾丸巨噬细胞清除
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2025-12-25
睾丸巨噬细胞（testicular macrophages, tMΦ）是睾丸间质中数量最多的免疫细胞，约占间质细胞20%，与Leydig细胞紧密相邻，形成细胞质交错结构，被视为“生育力的守护者”。近年单细胞谱系研究将其分为两个亚群：胚胎期即定植的卵黄囊来源“间质tMΦ”和出生后两周才迁入的骨髓来源“管周tMΦ”。前者高表达IL-10，维持局部免疫抑制并促进睾酮合成；后者呈MHCII⁺，负责抗原呈递与调节性T细胞互作，协助清除精子发生过程中逸出的自身抗原，巩固免疫豁免。睾丸巨噬细胞还分泌25-羟胆固醇、M-CSF和视黄酸等因子，直接刺激Leydig细胞甾体生成并支持精原干细胞增殖与分化。耗竭模型显示，tMΦ缺失可使睾酮下降50%，精子发生早期阻滞，证明其在内分泌和生殖功能中的双重枢纽地位。
前面我们已经介绍了巨噬细胞清除剂（Clodronate Liposomes）在清除肝脏、肺部、肠道、脑、外周血、脾脏巨噬细胞的应用情况，今天我们来分享下使用巨噬细胞清除剂（Clodronate Liposomes）清除睾丸巨噬细胞的相关文章及方法。
文献一
文章来源：Functional and phenotypic characteristics of testicular macrophages in experimental autoimmune orchitis (IF=5.2,Q1)
巨噬细胞清除方法：
使用50–60日龄的雄性Sprague–Dawley大鼠。预实验显示，用30 G针头经睾丸白膜下直接注射PBS脂质体会造成睾丸实质损伤，因此后续实验均改为腹腔（i.p.）给药。免疫组大鼠自免疫第0天起，每隔2–3天腹腔注射 2 ml Clodronate Liposomes（Clod-Lip，n = 12）或PBS脂质体对照（PBS-lip，n = 15），直至首次免疫后第50–60天处死。
结果分享：
免疫过氧化物酶染色显示，经睾丸组织和佐剂免疫、并分别注射PBS脂质体（A、C）或含氯膦酸盐脂质体（B、D）的大鼠睾丸切片中，ED1+（A、B）和ED2+（C、D）睾丸巨噬细胞的定位。睾丸中ED1+和ED2+巨噬细胞数量显著减少。
文献二
文章来源：Pituitary-testicular axis in rats lacking testicular macrophages (IF=5.2,Q1)
巨噬细胞清除方法：
实验选用成年雄性Wistar大鼠。用30 G针头在短暂乙醚麻醉下，向大鼠双侧睾丸内各注射150 μL巨噬细胞清除剂、PBS-脂质体（PBS-lp）或0.9% NaCl（每组15只）。分别于处理后第0、5、10与15天经颈静脉穿刺采血，血清置–20 °C保存，待测FSH、LH 与睾酮。第15天处死动物，取出睾丸与附性腺器官称重并做组织学检查。每组另取5只大鼠，于处死前48 h腹腔注射2 ml 3%台盼蓝生理盐水，以标记睾丸巨噬细胞。
结果分享：
图为处理后第15天，NaCl处理组（A）与巨噬细胞清除剂处理组（B）大鼠睾丸代表性间质区。光镜下，NaCl或PBS-lp注射组动物巨噬细胞胞质内充满台盼蓝阳性空泡，清晰可辨；Leydig细胞及曲细精管结构正常（图1A）。巨噬细胞清除剂处理组大鼠巨噬细胞缺失（图1B），仅个别动物偶见，数量不足正常值的2%（巨噬细胞清除剂组：7±5；PBS-lp组：430±16；NaCl组：418±32个/mm²间质，mean±SEM，N=5）。除此之外，Leydig细胞及生精上皮结构保持正常（图1B）。
文献三
文章来源：The human chorionic gonadotrophin-induced inflammation-like response is enhanced in macrophage-depleted rat testes (IF=3.9,Q2)
巨噬细胞清除方法：
为清除睾丸巨噬细胞，成年雄性 Wistar 大鼠 在右侧睾丸内注射 150 μl 含 Cl₂MDP（二氯亚甲基二膦酸）的脂质体（Clodronate Liposomes），使用 30 G 针头；左侧睾丸注射等量0.9% NaCl作为对照。注射后 第10天，腹腔注射 EDS（75 mg/kg） 诱导 Leydig 细胞凋亡，观察清除巨噬细胞后的组织反应。
结果分享：
图5A：巨噬细胞缺失侧（Cl₂MDP）淋巴细胞数量激增13倍（12 h峰值），对照侧仅2倍。
图5B：巨噬细胞数量在右侧始终接近零，左侧在24–72 h升高2倍。
图5C：Leydig细胞清除效率两侧一致（24 h内完全消失），说明吞噬功能由浸润单核细胞代偿。
文献四
文章来源：In vivo manipulation (depletion versus activation) of testicular macrophages: central and local effects (IF=3.9,Q2)
巨噬细胞清除方法：
实验选用Wistar雄性大鼠。成年大鼠（70日龄），幼年大鼠在本实验室出生，每窝留8只幼仔，于22日龄进行处理。在轻度乙醚麻醉下，用30 G针头向睾丸内注射：(i) 双侧各100 μL 巨噬细胞清除剂（双侧巨噬细胞耗竭组）；(ii) 右侧100 μ巨噬细胞清除剂，左侧100 μL 0.9 % NaCl（单侧巨噬细胞耗竭组）；(iii) 双侧各100 μL MTP-PE-脂质体（双侧巨噬细胞激活组）；(iv) 双侧各100 μL 0.9 % NaCl（对照组）。10天后断头处死，采集躯干血，血清置–20°C保存待测；并收集睾丸间质液。双侧注射巨噬细胞清除剂、MTP-PE-lp或NaCl的每组中取5只，于处死前1天腹腔注射2 mL 3 %台盼蓝生理盐水以标记睾丸巨噬细胞。取右侧睾丸置于Bouin-Hollande液固定，脱水后石蜡包埋，切片厚5 μm，行中性红或HE染色。
结果分享：
Figure 2a–b：幼年大鼠注射巨噬细胞清除剂后，巨噬细胞几乎完全消失，Leydig 细胞数量减少约 50%，但细胞大小不变。Figure 3A–C：巨噬细胞清除剂处理组幼年大鼠巨噬细胞数量显著减少，Leydig 细胞数量显著减少。
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规格 |
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