HiActi®细胞因子 | 小鼠气管类器官培养案例
小鼠气管类器官是从小鼠气管基底干细胞在体外3D基质胶中培养而成的微型器官。它能够自我更新和分化，形成包含基底细胞、纤毛细胞、分泌细胞（如杯状细胞）等多种气管上皮细胞类型的空腔结构，非常适合用于研究呼吸系统发育、疾病建模（如哮喘、慢性阻塞性肺疾病、感染）、药物筛选和再生医学。
小鼠气管类器官培养步骤
气管组织分离与单细胞悬液制备
人肠类器官的传代
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可按1：1 - 3：1进行传代培养。
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在培养板中，每孔加入一定量的培养基，用枪头将基质胶小心的刮出，取悬液，转移到离心管中。
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将要传代的隐窝置于冰上5-10 min。
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用枪头吹打基质胶，反复进行，直至基质胶被打碎，中间尽量避免气泡产生。
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将消化好的小肠粘膜转移至离心管中，加入PBS，摇晃均匀后用70 μm的细胞过滤筛过滤，1000 rpm室温离心5 min，结肠隐窝无需过滤。
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弃上清，加入培养基重悬沉淀，计数，隐窝的数量约10个/μL为佳。
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加入一定量的悬液到离心管中，室温离心5 min。
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加入预冷的基质胶混合物（基质胶：培养基为2：1）重悬沉淀。
气管类器官的培养与维护
气管类器官的传代
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当类器官培养7-9天或中央出现黑色团块时，吸弃旧培养基，加入Cebrary® Cell recovery solution for Organoid（41421ES）在4℃孵育30分钟以溶解Ceturegel。
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离心收集类器官，用基础培养基吹散，再次离心后，将细胞团重悬于新的Ceturegel中，按1:3比例接种到新的培养板中。
气管类器官的冻存与复苏
气管类器官的鉴定与应用
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免疫荧光染色鉴定
类器官经固定、破膜、封闭后，加入特异性一抗（如针对上皮细胞、纤毛细胞、基底细胞等标志物）孵育。
结合荧光二抗和DAPI染色后，通过激光共聚焦显微镜观察细胞组成和结构。
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炎症模型构建与评估
LPS干预：将培养4天的类器官暴露于不同浓度的LPS（60747ES）中24小时，构建炎症模型。
活死染色：使用钙黄绿素（706161ES）（活细胞）和碘化丙啶（726678ES）（死细胞）对LPS处理后的类器官进行染色，评估细胞活力。
qRT-PCR分析：提取LPS处理后类器官的RNA，通过实时荧光定量PCR（11184ES）检测炎症因子（如IL-1β，IL-6，TNF-α）的mRNA表达水平，评估炎症反应。
小鼠气管类器官培养结果
用光学显微镜观察小鼠气管类器官培养情况：
数据来源：Yeasen实验室
结果显示：小鼠气管类器官呈球形或椭球形的闭合囊泡结构，表面光滑均匀，无明显破碎或松散聚集。
Yeasen产品推荐
HiActi®细胞因子
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HiActi®细胞因子 |
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名称 |
货号 |
推荐浓度 |
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Recombinant Mouse EGF Protein 重组小鼠表皮生长因子 |
30 ng/mL |
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Recombinant Mouse R spondin 1/RSPO1 Protein, His Tag（HEK293) 重组小鼠RSPO1蛋白 |
500 ng/mL |
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Recombinant Mouse Noggin Protein (HEK293) 重组小鼠Noggin蛋白 |
100 ng/mL |
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Recombinant Mouse KGF-2/FGF-10 重组小鼠KGF-2/FGF-10 |
50 ng/mL |
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Recombinant Human Wnt-3a protein 重组人Wnt3a蛋白（液体） |
100 ng/mL |
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其他产品
参考文献：
1. WANG，Qinxin, WANG，Chenxuan, SUN，Denglong. Construction of an inflammatory model of mouse airway organoids. Drug Evaluation Research 2025; 48.
