恒温扩增技术，引领分子诊断POCT新方向

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2024-10-24

近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，基于核酸检测的诊断方法已大量建立并广泛应用于人类疾病的实验室检测中。与其他的核酸扩增技术相比，等温扩增有快速、高效、特异的优点且无需专用的设备，所以它一经出现就被许多学者认为是一种有可能与PCR媲美的检测方法。

因此，相信恒温扩增技术为基础的诊断仪器和试剂盒的开发和应用将会是未来分子诊断POCT的一个新方向。

主流恒温扩增技术原理介绍

	LAMP环介导等温扩增技术	RPA重组酶聚合酶扩增技术
原理	环介导等温扩增（loop mediated isothermal amplification,LAMP）使用具有链置换特性的Bst DNA聚合酶，针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在等温条件下高效、快速、特异性扩增靶标序列，可在60-65℃进行恒温扩增，15-60分钟左右即可实现10⁹～10¹⁰倍的核酸扩增。	重组酶与引物结合形成的蛋白-DNA复合物，能在双链DNA中寻找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就会发生链交换反应形成并启动DNA合成，对模板上的目标区域进行指数式扩增。被替换的DNA链与SSB结合，防止进一步替换。在这个体系中，由两个相对的引物起始一个合成事件，主要依赖于重组酶、Bsu酶和SSB蛋白。可以在37~42 ℃条件下，10~30 min内实现待测靶标的快速检测。
优势及应用	等温扩增因其反应快速、特异高、设备简单易操作、结果易于鉴定等优点，已经应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和转基因产品检测等领域，并且还将广泛应用于临床传染病诊断、环境监测、食品安全等领域，已经成为一种适用于分子POCT平台的理想方法。	它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测，可广泛应用于体外诊断、动物疫病、食品安全、生物安全、农业等领域。
分类	LAMP检测方法分为多种，包括比浊法、pH显色法、荧光染料法（如NHB、钙黄绿素、SYBR Green、Syto等）、荧光探针法等。	RPA检测方法分为多种，包括电泳法、EXO探针法、Fpg探针法、测流层析试纸条（LF-RPA）以及絮凝分析检测等。

部分产品性能展示

01 pH显色法RT-LAMP试剂

pH显色法RT-LAMP是将可视染料作为敏感指示剂，在60-65℃等温条件下，利用恒温水浴锅或普通PCR仪完成一步法RNA核酸扩增。30min即可通过反应后颜色的变化，判断是否感染病原体，结果更直观（阳性为橙黄色，阴性为洋红色）。该方法适用于大批量人群的快速检测。

RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit（13920）（可冻干版）

性能展示：

02 荧光染料法RT-LAMP试剂

荧光染料法RT-LAMP是将荧光染料（如SYBR Green、Syto等）作为荧光标记物，在扩增反应中与双链DNA结合后，荧光信号会增强800-1000倍。使用荧光定量PCR仪在60-65℃恒温条件下进行测试，约30min后即可通过扩增结果判断是否感染病原体，还可搭配微流控芯片或便携式检测仪快速检测。

性能展示：

RT-LAMP/RPA mix选择指南

产品分类	RT-LAMP mix			RPA mix
产品名称	RT-LAMP Dye Assay Kit(UDG plus)	RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit	RT-LAMP pH Sensitive Dye Chromogenic Version Freeze-Dryable Kit	Quick Fuse Amplifier
产品货号	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
产品类别	荧光染料法	pH显色法	pH显色法	探针法
产品组份	2组份 Buffer、酶mix	3组份 Buffer、RT酶、Bst酶	4组份 Buffer、RT酶、 Bst酶、冻干保护剂	4组份 Buffer、酶mix、醋酸镁
支持冻干	否	支持，不含冻干保护剂	支持，含冻干保护剂	不支持

LAMP/RT-LAMP原酶选择指南

产品分类	Bst酶		逆转录酶		UDG酶
产品名称	Bst Plus	Lyophilized Bst Plus	Ⅲ Reverse Transcriptase	III Reverse Transcriptase Glycerol-free	UDG	UDG,Glycerol-Free
产品货号	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
酶活浓度	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/μL	1 U/μL
产品组份	3组份 Buffer、酶、硫酸镁	2组份 Bst冻干粉、复溶液	2组份 Buffer、酶	单组份	单组份	单组份
支持冻干	否	是	否	是	否	是

RPA原酶选择指南

产品分类	Bsu聚合酶	重组酶	重组蛋白	单链结合蛋白	肌酸激酶	核酸外切酶
产品名称	Bsu	T4 UvsX	T4 UvsY	gp 32	Creatine Kinase	Exonuclease III
产品货号	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
酶活浓度	5 U/μL	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 U/μL
产品组份	单组份	单组份	单组份	单组份	单组份	2组份 Buffer、酶
支持冻干	否	否	否	否	否	否