环介导等温扩增（Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP）技术自2000年由Notomi等人开发以来，已成为分子诊断领域的重要工具。与传统PCR技术相比，LAMP具有操作简便、反应快速、设备要求低等优势，特别适用于现场快速检测（Point-of-Care Testing, POCT）。在LAMP检测体系中，荧光染料的应用实现了扩增产物的实时监测和定量分析，显著提升了检测的灵敏度和准确性，其中荧光染料的选择至关重要。

用于LAMP的荧光染料主要分为嵌入型和非嵌入型两类，其中嵌入型染料（如SYBR Green I、SYTO-9、EvaGreen）通过嵌入dsDNA的碱基对实现荧光增强，非嵌入型染料（如荧光素标记引物）通过与引物结合实现信号检测，两类染料对LAMP扩增效率的影响差异较大。尽管SYBR Green I是传统荧光定量PCR中最常用的双链DNA（dsDNA）嵌入染料，但在LAMP应用中，它往往表现出信号不稳定、抑制扩增甚至导致假阴性等问题。相比之下，SYTO-9等新型花青类染料凭借其独特的光谱特性、低抑制性及对LAMP特殊副产物（焦磷酸镁沉淀）的兼容性，成为了更优的选择。

SYBR Green I是一种不对称花菁类染料（cyanine dye），是目前实时PCR应用最广泛的DNA结合染料。其光谱特性如下：

• 激发峰：498 nm（蓝光区域）；
• 发射峰：522 nm（绿光区域）；
• 结合机制：主要通过与双链DNA（dsDNA）的小沟结合（minor-groove binding），辅以部分嵌入（intercalative）作用；
• 荧光增强倍数：结合dsDNA后荧光强度显著增强，但对单链DNA（ssDNA）和RNA的亲和力较低。

SYTO-9是SYTO系列绿色荧光核酸染料的代表成员，属于细胞膜通透性好的花青染料，具有以下光谱特性：
    激发峰：483–485 nm（DNA结合状态）；

• 发射峰：498–503 nm（DNA结合状态）；
• 结合机制：与核酸结合后荧光量子产率显著提高（未结合时<0.01，结合后>0.4）；
• 光谱兼容性：与SYBR Green I类似，可使用相同的滤光片组（FITC通道）进行检测。

尽管两种染料的发射波长略有差异，但均可通过常规的488 nm激光或蓝光LED激发，并在530 nm附近检测发射光，因此在使用常规实时荧光检测设备时具有互换性。

LAMP反应具有以下与常规PCR不同的技术特征，这些特征直接影响荧光染料的选择：

1. 恒温扩增：反应在60–65°C的恒定温度下进行，使用具有链置换活性的Bst DNA聚合酶；
2. 产物结构：产生大量长链 concatemer（串联重复序列）和环状结构，而非PCR的单一长度双链产物；
3. 高灵敏度：通常可在30–40分钟内完成扩增，产生大量DNA产物；
4. 实时监测需求：需要染料能够在不抑制酶活性的前提下实现实时荧光监测。

传统PCR染料并非为LAMP的独特条件（高产量、复杂结构产物、恒温、特定酶）设计。在LAMP的实际应用场景中，SYBR Green I和SYTO-9两种染料的表现存在显著差异，主要体现在信号曲线形态、抗干扰能力及对酶的抑制作用上。SYTO系列染料，如SYTO-9是目前许多商业化LAMP试剂盒的标准或推荐染料。同系列的SYTO-13、SYTO-82等也有应用。EvaGreen是一种结合后荧光增强的染料，通过形成非荧光二聚体降低背景，其对Bst酶的抑制性低于SYBR Green I但可能仍高于SYTO-9，在某些LAMP应用中有使用。

在LAMP环介导等温扩增技术中，选择SYTO-9而非SYBR Green I作为主流荧光染料并非简单的试剂替换，而是基于对扩增效率、检测性能和操作流程的深度优化，核心优势在于对Bst DNA聚合酶的低抑制性。SYTO-9凭借其适中的DNA结合常数、优异的抗沉淀干扰能力和良好的热稳定性，完美契合了LAMP的反应环境，显著提升了扩增效率和检测可靠性。随着POCT（即时检测）技术的普及，选择正确的荧光染料对于开发高性能、用户友好的LAMP检测产品至关重要。

翌圣生物作为国内分子诊断上游原料的领军企业，通过六大核心技术平台（双向分子酶理性设计与定向进化平台、蛋白高密度发酵与超洁净纯化平台、分子诊断试剂关键原料研发平台等），构建了覆盖荧光定量PCR与等温扩增的全系列酶原料产品矩阵。

荧光染料法RT-LAMP是将荧光染料（如Syto等）作为荧光标记物，在扩增反应中与双链DNA结合后，荧光信号会增强800-1000倍。使用荧光定量PCR仪在60-65℃恒温条件下进行测试，约30min后即可通过扩增结果判断是否感染病原体，还可搭配微流控芯片或便携式检测仪快速检测。

推荐产品：
RT-LAMP Dye Assay Kit (UDG plus) 一代RT-LAMP试剂（荧光染料法）

性能展示：

【翌圣LAMP产品选择指南】