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本品是一款可用于重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification, RPA)的原料,利用重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换DNA聚合酶等开发出的一种适用于DNA核酸检测的恒温扩增原料,仅需在反应体系中加入一对特异性引物、模板进行恒温扩增,再对纯化后的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,即可实现对检测结果的判读。
RPA技术的原理是重组酶蛋白与引物形成复合物,能在双链DNA中寻找同源序列。然后通过重组酶的链置换活性将引物插入同源位点,并且单链结合蛋白稳定置换DNA链。随后重组酶被分解,使得引物的3'末端被链置换并与DNA聚合酶结合,使其延长引物,通过循环重复该过程对模板上的目标区域进行指数式扩增。
1、T4 Uvs X、T4 Uvs Y、GP32、Bsu DNA Polymerase、CK等多酶参与;
2、恒温37-42℃反应10~30 min,即可将少量核酸分子扩增到可检测水平;
3、检测灵敏度可达单个拷贝和数十个拷贝或更少的DNA;
4、对仪器依赖程度低,操作简便、结果判读简单;
5、广泛应用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域。
1、不同GC含量和片段长度扩增
使用16727ES依次扩增GC含量为40%-70%的靶标及长度100bp-500bp的靶标,阳性均能够出现明显、唯一的电泳条带,阴性均无明显条带,表明该产品对于不同GC含量及不同长度的靶标均能完成扩增。

图1. (A) 16727扩增不同GC含量靶标;(B)16727扩增不同长度靶标
2、灵敏度测试
使用16727和市面上同类产品,同时检测竞品试剂盒中梯度稀释的阳性对照模板,检测结果显示,16727检测灵敏度更有优势。

图2. 16727和友商产品灵敏度比较
-25~-15℃保存,有效期1年。
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