Fluo-4,AM,Cell Permeant 细胞膜可渗透钙离子荧光探针

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产品说明书

FAQ

COA

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产品简介

 

细胞生物学实验中常使用Fluo-4, AM作为一种荧光探针来检测细胞内钙离子浓度变化。其检测原理基于Fluo-4, AM可穿透细胞膜进入细胞,之后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-4,从而被滞留在细胞内。Fluo-4游离配体几乎是非荧光性的,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是,当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光,荧光会增加60至80倍。

Fluo-4, AM是钙指示剂Fluo-4, AM的升级版本主要变化为后者分子上的两个氯原子被Fluo-4, AM上的氟所取代,该结构上的微小变化使Fluo-4, AM加载更快,在相同浓度下检测信号更强

 

组分信息

 

组分名称

40704ES50

40704ES72

40704ES80

Fluo-4, AM, Cell Permeant 细胞膜可渗透钙离子荧光探针

50 μg

50 μg

 1 mg

 

产品性质

 

CAS 号(CAS NO.)

273221-67-3

分子式(Molecular Fomular)

C51H50F2N2O23

分子量(Molecular Weight)

1096.94

Ex/Em(nm, Ca2+-bound)

494/516

纯度(Purity)

≥90% (HPLC)

外观(Appearance)

红色粉末

结构式(Structure)

 

储存条件

 

室温运输。-20℃避光干燥保存可保存1年

 

使用说明

 

  1. Fluo-4/AM储存液的配制

利用高质量无水DMSO溶解Fluo-4/AM配制成2 - 5 mM的储存液,该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存,最长可保存6个月,但是避免反复冻融,建议分装保存。每次使用前需回温至室温。

  1. Fluo-4/AM工作液的配制

利用合适缓冲液HHBS)Fluo-4/AM稀释成2 - 20 μM的工作液并添加0.04% Pluronic F-127和有机阴离子转运抑制剂probenecid(0.5 - 1 mM)。

注: 对于大多数细胞系,建议最终浓度为4 - 5 μM的Fluo-4/AM。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须根据经验确定。

 Fluo-4/AM工作液需现配现用,避免反复冻存。

Pluronic F-127 可以防止Fluo-4/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。

  1. 取出预培养的细胞,除去培养基,使用缓冲液洗涤细胞3次。

注:如果使用含血清的培养基,血清中的酯酶会降低Fluo-4/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高,所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。

  1. Fluo-4/AM工作液加入细胞,加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养30 - 60 min。
  2. 用缓冲液HHBS)洗涤细胞 3 次,以充分去除残留的Fluo-4/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。
  3. 数字成像显微镜检测细胞。

注:某些细胞具有自体荧光会影响结果分析,需使用未加载探针细胞做对照,在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。

 

注意事项

 

1. 本产品仅作科研用途

2. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

4. 乙酰氧基甲基酯(Acetoxymethyl ester,AM)容易吸潮,从冰箱取出后,请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量,开封前请将其短暂离心,以保证粉末落入管底

5. 第一次使用时,建议母液现配现用。且溶解后的试剂尽可能在短时间内使用,以保证实验效果。

6. 母液遇水极易分解,若单次不能用完,建议分装保存,例如5μL/管,用封口膜封口,并严格做到≤-20℃密封干燥保存

7. 建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等,找到最佳实验条件。

 

Ver.CN20241124

 

400-6111-883