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产品简介
Fluo-3, AM是一种常用的检测细胞内钙离子浓度的荧光探针。它穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3， 从而被滞留在细胞内。Fluo-3游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60至80倍，最大激发波长为506 nm，最大发射波长为526 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488 nm左右，发射波长为525 - 530 nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
组分信息
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组分名称 |
40703ES50 |
40703ES72 |
40703ES80 |
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Fluo-3, AM (Powder) , Cell Permeant 细胞膜可渗透钙离子荧光探针 |
50 μg |
5×50 μg |
1 mg |
产品性质
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中文名称（Chinese Synonym） |
钙荧光探针Fluo-3, AM |
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CAS 号（CAS NO.） |
121714-22-5 |
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分子式（Molecular Fomular） |
C51H50Cl2N2O23 |
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分子量（Molecular Weight） |
1129.85 |
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Ex/Em（nm, Ca2+-bound） |
506/526 |
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纯度（Purity） |
≥90% (HPLC) |
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外观（Appearance） |
红色粉末 |
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结构式（Structure） |
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储存条件
室温运输。-20℃避光干燥保存，可保存1年。
使用说明
- Fluo-3/AM储存液的配制
利用高质量无水DMSO溶解Fluo-3/AM配制成2 - 5 mM的储存液，该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存，最长可保存6个月，但是避免反复冻融，建议分装保存。每次使用前需回温至室温。
- Fluo-3/AM工作液的配制
利用合适缓冲液（如HHBS）将Fluo-3/AM稀释成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有机阴离子转运抑制剂probenecid（0.5 - 1 mM）。
注：① 对于大多数细胞系，建议最终浓度为4 - 5 μM的Fluo-3/AM。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须根据经验确定。
② Fluo-3/AM工作液需现配现用，避免反复冻存。
③ Pluronic F-127 可以防止Fluo-3/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。
- 取出预培养的细胞，除去培养基，使用缓冲液洗涤细胞3次。
注：如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会降低Fluo-3/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。
- 将 Fluo-3/AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养30 - 60 min。
- 用缓冲液（如HHBS）洗涤细胞 3 次，以充分去除残留的Fluo-3/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。
- 数字成像显微镜检测细胞。
注：某些细胞具有自体荧光会影响结果分析，需使用未加载探针细胞做对照，在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethylester，AM）容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底
5. 第一次使用时，建议母液现配现用。且溶解后的试剂尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。
6. 母液遇水极易分解，若单次不能用完，建议分装保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并严格做到≤-20℃密封干燥保存。
7. 建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。
Ver.CN20241124
