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产品简介
Indo-1是一种细胞生物学常用的钙离子荧光探针，与Fura-2为目前使用最广泛的比率法测定的钙荧光指示剂，Indo-1能特异性地结合Ca2+，同时可发出荧光，结合 Ca2+后的最大发射波长从结合前的475 nm向400 nm（Ca2+饱和时）偏移，该信号变化可被流式细胞仪较好的捕捉：在氩离子激光器的351-364光谱范围内单一波长激发该探针，在400 nm 和475 nm 的波长处分别检测结合钙离子和未结合钙离子的荧光信号，通过二者荧光强度的比率测定钙离子浓度。由于Indo-1是极性大的酸性化合物，无法进入细胞内，为此在其负性基团上结合乙酰氧甲酯，使其成为Indo-1/AM，该变化既增加了酯溶性又消除了负电荷，极大的提高了细胞渗透性。在细胞内，Indo-1/AM被酯酶水解成Indo-1后可与胞浆游离Ca2+可逆性结合。
组分信息
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组分名称 |
40775ES50 |
40775ES72 |
40775ES80 |
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Indo-1, AM , Cell Permeant 细胞可渗透钙离子荧光探针 |
50 μg |
5×50 μg |
1 mg |
产品性质
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CAS 号（CAS NO.） |
112926-02-0 |
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分子式（Molecular Fomular） |
C47H51F2N3O22 |
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分子量（Molecular Weight） |
1009.91 |
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Ex/Em（nm, Ca2+-bound） |
346/475 |
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结构式（Structure） |
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储存条件
室温运输。-20℃避光干燥保存，可保存1年。
使用说明
- Indo-1/AM储存液的配制
利用高质量无水DMSO溶解Indo-1/AM配制成2 - 5 mM的储存液，该储存液可分装于-20℃避光干燥密封保存，最长可保存6个月，但是避免反复冻融，建议分装保存。每次使用前需回温至室温。
- Indo-1/AM工作液的配制
利用合适缓冲液（如HHBS）将Indo-1/AM稀释成2 - 20 μM的工作液，并添加0.04% Pluronic F-127和有机阴离子转运抑制剂probenecid（0.5 - 1 mM）。
注：① 对于大多数细胞系，建议最终浓度为4 - 5 μM的Indo-1/AM。细胞加载所需的指示剂的确切浓度必须根据经验确定。
② Indo-1/AM工作液需现配现用，避免反复冻存。
③ Pluronic F-127 可以防止Indo-1/AM在缓冲液中聚合并能帮助其进入细胞。
- 取出预培养的细胞，除去培养基，使用缓冲液洗涤细胞3次。
注：如果使用含血清的培养基，血清中的酯酶会降低Indo-1/AM进入细胞的效果。另外含有酚红的培养基会使本底值略微偏高，所以加工作液之前需尽量去除培养基残留。
- 将 Indo-1/AM工作液加入细胞，加入量以覆盖细胞为准。在37℃培养30 - 60 min。
- 用缓冲液（如HHBS）洗涤细胞 3 次，以充分去除残留的Indo-1/AM工作液。然后加入缓冲液覆盖细胞。
- 数字成像显微镜检测细胞。
注：某些细胞具有自体荧光会影响结果分析，需使用未加载探针细胞做对照，在结果分析时在同一波长下扣除自荧光。
注意事项
1. 本产品仅作科研用途。
2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
3. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
4. 乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethylester，AM）容易吸潮，从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。由于试剂极其微量，开封前请将其短暂离心，以保证粉末落入管底
5. 第一次使用时，建议母液现配现用。且溶解后的试剂尽可能在短时间内使用，以保证实验效果。
6. 母液遇水极易分解，若单次不能用完，建议分装保存，例如5μL/管，用封口膜封口，并严格做到≤-20℃密封干燥保存。
7. 建议您在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。
Ver.CN20241124
