Hieff NGS^® DNA Fragmentation Reagent是针对二代测序高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于50 ng-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS^® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）进行文库构建中接头连接反应。

• 适用50 ng-1 μg的基因组DNA
• 高质量片段化酶，可随机切割双链DNA，酶切片段无偏好性
• 片段化、末端修复/加A一步完成
• 严格的批次性能与稳定性质控

 

产品组分

组分编号	组分名称	24 T	96 T	10000 T
13507-A	Smearase® Buffer	240 μL	960 μL	100 mL
13507-B	Smearase® Enzyme	120 μL	480 μL	50 mL

 

运输与保存方法

干冰运输。-20℃保存，有效期18个月。

 

注意事项

1. 本试剂盒兼容范围为50 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A₂₆₀/A₂₈₀ = 1.8-2.0的高质量Input DNA。

2. 若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在TE（10 mM Tris-HCl ,1 mM EDTA，pH 8.0）中进行片段化。

3. 对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。

表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表

插入片段主峰大小	片段化时间	优化范围
900 bp	8 min	8-9 min
750 bp	10 min	9-11 min
300 bp	15 min	11-16 min
250 bp	20 min	16-22 min
200 bp	25 min	22-30 min

【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。

4. 参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

使用方法

DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）

该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。

1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表2反应体系。

表2  DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系

名称	体积（μL）
Input DNA	x
Smearase® Buffer	10
Smearase® Enzyme	5
1×TE	Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。

表3  DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序

温度	时间
热盖105°C	On
4 °C	1 min*
30 °C	8-25 min**
65 °C	20 min
4 °C	Hold

【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。

5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS^® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS^® Rapid DNA Ligation Module for Kit（Cat#13580）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。

 

参考实例

使用本试剂盒对200 ng Human gDNA (NA12878) 样本进行酶切检测，片段化结果见下图。

 

 

HB221228