产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
Hieff ® Smearase 是针对高通量测序平台设计的新一代酶切试剂。本品采用高质量的片段化酶，酶切效果稳定，偏好性 低，可有效降低片段化的时间和成本，摆脱了繁琐的超声步骤，让片段化过程变得更加简单高效。
产品信息
|
货号 |
12907ES08 / 12907ES24 /12907ES96/12907ES98 |
|
规格 |
8 T /24 T /96 T/5000 T |
组分信息
|
组分编号 |
组分名称 |
12907ES08 |
12907ES24 |
12907ES96 |
12907ES98 |
|
12907 |
Hieff ® Smearase |
80 μL |
240 μL |
960 μL |
50 mL |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期18个月。
注意事项
1. 本试剂盒兼容范围为 1 ng – 1 μg Input DNA。应尽可能使用 A260/A280 = 1.8-2.0 的高质量 Input DNA。
2. 若 Input DNA 中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将 DNA 稀释在 ddH2O 或不含 EDTA的 10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化，EDTA 耐受范围为 0-2 mM。
3. 对于常规的高质量基因组 DNA，酶切时间参考表 1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种 GC 含量的模板。
表 1 常规基因组 DNA片段化时间推荐表
|
插入片段主峰大小 |
片段化时间 |
优化范围 |
|
600 bp |
5 min |
3-10 min |
|
400 bp |
10 min |
8-15 min |
|
250 bp |
15 min |
10-20 min |
|
200 bp |
20 min |
12-25 min |
|
150 bp |
25 min |
20-30 min |
【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。
4. 参考表 1 片段化时间可将 DNA 酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。
5. 该酶在高温条件下即可失活。
6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7. 本产品仅用作科研用途！
使用方法
DNA 片段化（DNA Fragment）
该步骤将基因组 DNA 片段化。
1. 将表 2 中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。
2. 于冰上配制表 2 反应体系。
表 2 DNA 片段化PCR反应体系
|
名称 |
体积（μL） |
|
Input DNA |
x |
|
Hieff ® Smearase |
10 |
|
ddH2O |
Up to 60 |
3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。
4. 将上述 PCR 管置于 PCR 仪，设置表 3 所示反应程序，进行 DNA 片段化反应。
表 3 DNA 片段化PCR反应程序
|
温度 |
时间 |
|
热盖 105°C |
On |
|
4 °C |
1 min* |
|
30 °C |
3-30 min** |
|
72 °C |
10 min |
|
4 °C |
Hold |
【注】：*DNA 片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置 4℃，待模块温度降至 4℃时，将 PCR 管放入 PCR 仪即可。
**对于完整的基因组 DNA，酶切时间参考表 1。
5. 产物如需纯化，可使用 Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或 AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。
参考实例
使用 Hieff ® Smearase 对 Human gDNA 样本进行酶切，片段化结果见图 1。
图 1 Hieff ® Smearase 酶切 200 ng Human gDNA 样本（不同酶切时间片段化效果检测）
Ver.CN20240617
