Hieff NGS^® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent是针对Illumina®与MGI®高通量测序平台设计的新一代酶切法建库试剂。本品采用高质量的片段化酶，摆脱了繁琐的超声过程，同时简化了操作流程，将片段化模块与末端修复/加A模块合二为一，极大的降低了建库的时间和成本。可应用于500 pg-1 μg常规动植物基因组、微生物基因组等样本，在单管内实现DNA的片段化、末端修复和A尾添加反应。反应产物无需纯化，即可使用Hieff NGS^® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）或Hieff NGS^® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）进行文库构建中接头连接反应。

 

产品组分

组分编号	组分名称	24 T	96 T	1000T
12609	Smearase® Mix	240 μL	960 μL	10mL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，有效期1年。

 

注意事项

1）本试剂盒兼容范围为500 pg – 1 μg Input DNA。应尽可能使用A260/A280 = 1.8-2.0的高质量Input DNA。

2）若Input DNA中引入高浓度金属离子螯合剂或其他盐，可能会影响后续实验，建议将DNA稀释在ddH2O或不含EDTA的10 mM Tris Buffer (pH 7.5-8.0)中进行片段化。

3）对于常规的高质量基因组DNA，酶切时间参考表1。本试剂盒片段化偏好低，耐受各种GC含量的模板。

表1 常规基因组DNA片段化时间推荐表

插入片段主峰大小	片段化时间	优化范围
600 bp	5 min	3-8 min
350 bp	8 min	5-12 min
250 bp	10 min	8-15 min
200 bp	13 min	10-20 min
150 bp	20 min	12-25 min

【注】：以上为推荐时间，需客户在自己的实验体系中进行微调，以达到最佳效果。

4）参照片段化步骤推荐条件可将DNA酶切为所需大小，为保证优质稳定的片段化效果，片段化过程请于冰上操作。

5）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6）本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

DNA片段化/末端修复/dA尾添加（DNA Fragment/End Preparation/dA-Tailing）

该步骤将基因组DNA片段化，同时进行末端修复及dA尾添加。

1. 将表2中试剂解冻后，颠倒混匀，置于冰上备用。

2. 于冰上配制表2反应体系。

表2  DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应体系

名称	体积（μL）
Input DNA	x
Smearase® Mix	10
ddH2O	Up to 60 μL

3. 使用移液器轻轻吹打或振荡混匀，并短暂离心将反应液离心至管底。

4. 将上述PCR管置于PCR仪，设置表3所示反应程序，进行DNA片段化，末端修复及dA尾添加反应。

表3  DNA片段化/末端修复/dA尾添加 PCR反应程序

温度	时间
热盖105°C	On
4 °C	1 min*
30 °C	3-20 min**
72 °C	20 min
4 °C	Hold

【注】：*DNA片段化过程为有效控制片段化效果，避免过度酶切，反应程序可预先设置4℃，待模块温度降至4℃时，将PCR管放入PCR仪即可。**对于完整的基因组DNA，酶切时间参考表1。

5. 产物如需纯化，可使用Hieff NGS® DNA Selection Beads（Cat#12601）或AMPure XP Beads（Cat#A63880）或其他等效产品。也可以直接驳接Hieff NGS® Ultima DNA Ligation Module（Cat#12604）或Hieff NGS® Fast-Pace DNA Ligation Module（Cat#12607）试剂盒，进行接头连接。详细说明请见后者的说明书。

 

参考实例

使用Hieff NGS^® Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent对小牛胸腺gDNA样本进行酶切，片段化结果见图1。

 

图1  Fast-Pace DNA Fragmentation Reagent酶切800 ng小牛胸腺gDNA样本（不同酶切时间片段化效果检测）

 

HB220118