产品描述

5× Hieff Canace^® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)是基于新一代高保真DNA聚合酶Canace开发的，针对于高通量测序领域中多重PCR文库构建应用专门优化的。Canace酶基于Pyrococcus furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。其蛋白结构包含5’→3’聚合酶结构域和经过改造的3’→5’外切酶结构域。这种组合大幅度提升了酶的耐热性，保真性。耐热温度达到98℃，保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了独特的延伸因子，扩增速度达到15 sec/kb。本产品为5×mix PCR混合液，可添加的模板、引物体积范围大，使您的实验更加灵活（本公司另有2×mix可供选择，Cat.10138）。

 

产品应用

多重PCR文库构建。

 

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

2.值得注意的是，多重PCR建库实验本身具有一定的难度，通常需要进行优化，如您在使用本产品时遇到困难，可联系我们的技术支持，我们有多重优化方案，可帮助您更好的构建实验体系。

3.本产品仅作科研用途！

 

PCR反应体系（推荐冰上配制）

组分	体积 μL
ddH2O	to 50
DNA模板	X
Primer mix (X μM)	X
5×Hieff Canace® PCR Master Mix (for Multiplex PCR)	10

【注】：1）试剂使用：使用前要充分解冻混匀。
2）引物与模板：第一轮多重PCR进行target enrichment，其中的引物和模板条件需要自行摸索。
第二轮多重PCR引物的浓度建议使用：10 μM引物 加2 μL左右。

 

第一轮PCR扩增程序：

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	20 sec	15-45
退火/延伸	60℃	4-10 min
终延伸	72℃	5 min	1

【注】：在PCR仪上设置上表中的反应程序进行多重PCR反应（设置热盖温度至105℃左右）。

退火/延伸时间：100重PCR推荐4 min；1000重推荐8-10 min需要自己根据引物情况摸索。

 

PCR产物磁珠纯化

建议在50 μL 反应体系中加45 μL磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

 

第二轮PCR扩增程序：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	30 sec	1
变性	98℃	15 sec	25-35（可自行优化）
退火	60℃	30 sec
延伸	72℃	1 min
终延伸	72℃	5 min	1

【注】：退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为30 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

 

PCR产物磁珠纯化

建议在50 μL 反应体系中加45μL磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

 

HB220511