本产品适用于多重PCR实验。2×Hieff NGS^® HG Multiplex PCR Master Mix 以热启动多重PCR酶制剂 与 2×扩增缓冲液为组分配置成预混液。本预混液可兼容GC含量在 25%-70%左右的多重基因扩增，快速便捷地用于多重PCR反应，具备高均一性、高特异性和高灵敏度的特点。本试剂适用于不同多重PCR需求， 可用于凝胶电泳鉴定20对以内不同大小片段的多重产物，也可用于进行数百重及以上扩增子的富集。

 

组分信息

产品编号	组分名称
13283	2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix

 

储存条件

2~8℃保存，有效期2年。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

2.本产品仅用作科研用途！

 

参考反应体系

组分	体积（μL）	终浓度
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix	15	1×
Primer mix	x	0.1 μM-0.5 μM
模板 DNA	1 ng -400 ng	-
无菌超纯水	up to 30	-

【注】:1）上表中 DNA 量和引物浓度均为推荐用量和浓度，可根据具体实验情况进行调整最适浓度。

2）参考建议：每条引物的浓度可在 0.1 μM-0.5 μM 范围内进行调整。

3）预混液中已经包含扩增所需要的酶、dNTP、盐离子等，无需额外添加。

第一轮扩增程序

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	95℃	20 sec	15-45
退火延伸	60℃	4-10 min
终延伸	72℃	5 min	1

【注】:在 PCR 仪上设置上表中的反应程序进行多重 PCR 反应（设置热盖温度至 105℃左右）。 退火延伸时间：100 重 PCR 推荐 4 min；1000 重推荐 8-10 min 需要自己根据引物情况摸索。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

第二轮扩增程序

循环步骤	温度（℃）	时间	循环数
预变性	95℃	3 min	1
变性	95℃	20 sec	15-45
退火	60℃	1 min
延伸	72℃	30 sec
终延伸	72℃	5 min	1

【注】:退火温度和时间上推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为1 min，可以在30 s-1 min 内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。

PCR 产物磁珠纯化: 建议在 30 μL 反应体系中加 27μL 磁珠（Cat:12601）进行产物纯化。

 

Ver.CN20230816