Hieff NGS^® Novel DNA Ligation Module for kit 是针对 Illumina^® & MGI^® 高通量测序平台文库构建专业设计的 DNA 连接模块，其中最大的亮点为本产品采用一款我公司自主研发的高效连接酶 Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端 DNA 片段或双链 3´-dA DNA 片段的两端连接 Illumina^® & MGI^® 测序平台适用的 DNA 接头，具有连接效率高、简便、可实现自动 化等优势。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

 

产品组分

产品编号	组分名称	产品编号/规格
		12805ES24	12805ES96	12805ES98
12805-A	Novel T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL	5×1 mL
12805-B	Ligation Enhancer	720 μL	4×720 μL	30 mL

 

运输与保存方法

干冰运输。-25~-15℃保存，有效期18个月。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

1.Adapter 的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter 用量过高可能会产生较多 Adapter Dimer；用量较低可 能会影响连接效率及文库产量。表 1 列举了使用本试剂盒，不同 Input DNA 量推荐的 Adapter 使用量。

表 1    500 pg-1 μg Input DNA 推荐的 Adapter 使用浓度

Input DNA	Adapter : Input DNA 摩尔比	Input DNA	Adapter : Input DNA 摩尔比
1 μg	10:1	50 ng	100:1
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	1 ng	200:1
100 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA 摩尔数（pmol）≈ Input DNA 质量(ng)/ [0.66 × Input DNA 平均长度（bp）]。

2.目前主流的合并法 DNA 建库试剂盒，其末端修复和加 A 处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的 商业化末端修复/加 A 体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于 20℃，反应 15 分钟即可。

表 2    Adapter Ligation 体系

名称	体积（μL）
dA-tailed DNA	60
Ligation Enhancer	30*
Novel T4 DNA Ligase	5
DNA Adapter	5**

【注】：*对于 3.3×Fast Ligation Buffer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时后离心使用。

**根据自身需求加入适量的接头，本公司接头浓度与常规商业化试剂盒一致，皆为 15 μM。

【接头添加计算举例】：

当 Input DNA 为 100 ng，Input DNA 长度为 300 bp 时，接头应该添加多少？

第一步，计算 Input DNA 摩尔数。公式：Input DNA 摩尔数（pmol）≈ Input DNA 质量(ng)/ [0.66 × Input DNA 平均长度（bp）]；

Input DNA  摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol； 

第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表 2 查询接头添加比例；

根据表 2，查得 Input DNA 100ng 时接头添加比例 100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol； 

 第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）；

综上，接头可添加 3.4 μL，加 1.6 μL 水补齐至 5 μL。（注：接头最大加入体积不超过 5 μL。

 

HB230215