Hieff NGS^® Novel DNA Ligation Module是针对Illumina^®与MGI^®高通量测序平台文库构建专业设计的DNA连接模块，采用一款我公司自主研发的新型连接酶Novel T4 DNA ligase。本产品可在双链平末端DNA片段或双链3´-dA DNA片段的两端连接Illumina^®与MGI^®测序平台适用的DNA接头，具有高效的连接能力，兼容各类样本，同时也适用于自动化平台，对于复杂结构核酸片段的连接更显优势，均可得到优异的测序质量。本产品与Hieff NGS^® Ultima Endperp Mix（Cat#12605），2×Novel HF Amplification Mix for MGI^®（Cat#13344）共同用于DNA文库构建，通过MGI^®高通量平台测序已验证其有效性。本产品中提供的所有试剂组分，都经过严格的质量与功能验证，最高程度保障产品优异性能与批间稳定性。

 

产品组分

产品编号	组分名称	产品编号/规格
		12626ES24	12626ES96
12626-A	Novel T4 DNA Ligase	120 μL	480 μL
12626-B	5×Novel Ligation Buffer	480 μL	2×960 μL

 

运输与保存方法

冰袋运输。

-20℃保存，效期18个月。

 

注意事项

1.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

2.本产品仅用作科研用途！

 

使用方法

1. Adapter的质量和使用浓度直接影响连接效率及文库产量。Adapter用量过高可能会产生较多Adapter Dimer；用量较低可能会影响连接效率及文库产量。表1列举了使用本试剂盒，不同Input DNA量推荐的Adapter使用量。

表1  500 pg-1 μg Input DNA推荐的Adapter使用浓度

Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比	Input DNA	Adapter : Input DNA摩尔比
1 μg	10:1	50 ng	100:1
500 ng	20:1	25 ng	200:1
250 ng	40:1	1 ng	200:1
100 ng	100:1	500 pg	400:1

【注】：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]。

2. 目前主流的合并法DNA建库试剂盒，其末端修复和加A处理后一般不纯化，直接进行接头连接。本试剂盒可与主流的商业化末端修复加A体系兼容，进行接头连接。反应体系请参考如下配制，涡旋瞬离后置于20℃，反应15分钟即可。

表2  Adapter Ligation体系

名称	体积（μL）
dA-tailed DNA	60
5×Novel Ligation Buffer	20*
Novel T4 DNA Ligase	5
DNA Adapter	X**
ddH2O	To 100

【注】：*对于5×Novel Ligation Buffer，请上下颠倒、振荡，充分混匀并瞬时离心后使用。

**根据自身需求加入适量的接头。

【接头添加计算举例】：

当Input DNA为100 ng，Input DNA长度为300 bp时，接头应该添加多少？

第一步，计算Input DNA摩尔数。公式：Input DNA摩尔数（pmol）≈ Input DNA质量(ng)/ [0.66 × Input DNA平均长度（bp）]；

Input DNA 摩尔数（pmol）=100÷（0.66×300）=0.5 pmol；

第二步，计算接头添加摩尔数。根据注意事项三表2查询接头添加比例；

根据表2，查得Input DNA 100ng时接头添加比例100:1，则接头添加摩尔数=100×0.5 pmol=50 pmol；

第三步，计算接头添加体积。接头浓度=15 μmol/L（如使用其他接头，浓度需要依据其他接头浓度参数）；

接头添加体积=接头添加摩尔数（50 pmol）÷接头浓度（15 μmol/L）=3.34 μL（注：15 μmol/L=15 pmol/μL）

综上，接头可添加3.4 μL，加1.6 μL水补齐至5 μL。（注：接头最大加入体积不超过5 μL）

HB220829