2×Hieff Canace®高保真酶预混液|2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix

2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶预混液是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系。预混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。预混液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增目的片段的长度可长达10 kb，该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可，并可以通过两步法的程序进行扩增，简化了实验步骤，节省了时间。本产品中不含染料，PCR产物需加入Loading buffer后进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。

产品应用

基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。

运输与保存方法

冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。

注意事项

1）解冻后Master Mix可能出现晶体沉淀，使用前务必涡旋振荡混匀至沉淀消失，不影响试剂性能。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！

推荐PCR反应体系（冰上配制）

组分	体积	终浓度
ddH2O	to 50 μL	-
DNA模板	适量	-
Primer正向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
Primer反向 (10 μM)	2.5 μL	0.5 μM
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix	25 μL	1×

【注】：
1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP终浓度：在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：

模板种类	扩增片段1 kb-10 kb
基因组DNA	50 ng-200 ng
质粒或病毒DNA	10 pg-20 ng
cDNA	1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10)

PCR扩增程序：有以下三种程序可选择，优先选择两步法程序。

两步法程序（优先推荐）：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	30-35
延伸	68℃	30 sec/kb	30-35
终延伸	72℃	5 min	1

三步法程序（常规程序）：

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	30-35
退火	60℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

梯度温度退火程序（难扩增基因推荐程序）:

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3 min	1
变性	98℃	10 sec	15，每个循环降低1℃
梯度退火	70-55℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
变性	98℃	10 sec	20
正常退火	55℃	20 sec
延伸	72℃	30 sec/kb
终延伸	72℃	5 min	1

【注】：
1）预变性温度和时间：推荐温度：98℃，时间：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐温度：60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐温度：72℃。时间：30 sec/kb，复杂模板根据实际情况可延长至60 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端。
5）不同扩增程序下的特点：

程序类型	两步法	三步法	梯度退火
速度	最快	中等	慢
特异性	高	中等	高
PCR产量	中等	最高	中等
检出率	高	中等	高

相关产品

产品名称	货号	规格
Hieff Canace^® Gold High-Fidelity DNA Polymerase高保真DNA聚合酶	10148ES60/76/80	100/500/1000 U
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒HOT	10909ES20	20 T
零背景TOPO-Blunt平末端克隆试剂盒（不含MCS多克隆酶切位点）	10910ES20	20 T
一步法快速克隆试剂盒HOT	10911ES20	20 T
多片段一步法快速克隆试剂盒HOT	10912ES10	10 T
定点突变试剂盒HOT	11003ES10	10 T
多点突变试剂盒HOT	11004ES10	10 T

HB210831

Q：Canace 错配率是多少?Canace Gold 是多少？

A：Taq 酶错配率:0.0002，大约 5kb 有一个碱基发生突变。Canace 约 0.000399%，是 taq 酶的 52 倍。Canace Gold 与 Canace 保真性是一样的。

Q：Canace 具有保真性的原理？

A：具有 3’-5’的核酸外切酶活性，有校正功能。Q：Canace 高保真酶基于什么改造的酶？ A：Pfu 改造的。

Q：Canace 高保真酶是否为热启动高保真酶？

A：暂时不是热启动，后续会有热启动高保真酶。

Q：Canace 扩增后是平末端产物，如何加 A 尾？

A:仅供参考：先对平末端PCR 产物纯化后，浓度要求至少 20ng/ ul（跑胶图像条带清晰，明亮即可），取 14.5 ul PCR 产物，加入 2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq酶，在 72℃反应 10~20min, 后直接回收纯化加A 尾的DNA 片段。

Q：Canace 可以用于酵母菌液吗？

A:不建议用。若要用则需通过煮沸，反复冻融，加蜗牛酶等等处理方法破壁后尝试。

Q：Canace 能用于多少长度的片段？

A：验证范围内长度理论上是可以的（验证范围：简单模板 20kb，复杂模板 10kb）。但具体能否扩出，还与模板和引物等有关。

[1] Zhang C, Zhou B, Gu F, et al. Micropeptide PACMP inhibition elicits synthetic lethal effects by decreasing CtIP and poly(ADP-ribosyl)ation. Mol Cell. 2022;82(7):1297-1312.e8. doi:10.1016/j.molcel.2022.01.020(IF:17.970)
[2] Zhu M, Dai X. Growth suppression by altered (p)ppGpp levels results from non-optimal resource allocation in Escherichia coli. Nucleic Acids Res. 2019;47(9):4684-4693. doi:10.1093/nar/gkz211(IF:11.147)
[3] Rizwan HM, Zhimin L, Harsonowati W, et al. Identification of Fungal Pathogens to Control Postharvest Passion Fruit (Passiflora edulis) Decays and Multi-Omics Comparative Pathway Analysis Reveals Purple Is More Resistant to Pathogens than a Yellow Cultivar. J Fungi (Basel). 2021;7(10):879. Published 2021 Oct 19. doi:10.3390/jof7100879(IF:5.816)
[4] Li T, Zhou B, Luo Z, et al. Structural Characterization of a Neutralizing Nanobody With Broad Activity Against SARS-CoV-2 Variants. Front Microbiol. 2022;13:875840. Published 2022 Jun 2. doi:10.3389/fmicb.2022.875840(IF:5.640)
[5] Wang W, Wang L, Wang L, et al. Transcriptome analysis and molecular mechanism of linseed (Linum usitatissimum L.) drought tolerance under repeated drought using single-molecule long-read sequencing. BMC Genomics. 2021;22(1):109. Published 2021 Feb 9. doi:10.1186/s12864-021-07416-5(IF:3.969)
[6] Wang T, Ren D, Guo H, et al. CgSCD1 Is Essential for Melanin Biosynthesis and Pathogenicity of Colletotrichum gloeosporioides. Pathogens. 2020;9(2):141. Published 2020 Feb 20. doi:10.3390/pathogens9020141(IF:3.018)
[7] Lv Y, Li X, Zhang H, Zou F, Shen B. CircRNA expression profiles in deltamethrin-susceptible and -resistant Culex pipiens pallens (Diptera: Culicidae). Comp Biochem Physiol B Biochem Mol Biol. 2022;261:110750. doi:10.1016/j.cbpb.2022.110750(IF:2.231)

52倍Taq高保真预混液2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix

产品说明书

FAQ

COA

已发表文献

(10136ES) 2× Hieff Canace® PCR Master Mix 高保真酶预混液

(10137ES) 5× Hieff Canace PCR Master Mix(for Multiplex PCR)

(10106ES) 2×Hieff® Robust PCR Master Mix(With Dye)

(10154ES) 83倍Taq高保真预混液2×Hieff Canace® Plus PCR Master Mix(With Dye)

(10157ES) 2×Hieff® Ultra-Rapid HotStart PCR Master Mix(with Dye)

(10164ES) 5s/kb快速高保真预混液2× Hieff Canace® AdvanceFast PCR Master Mix (With Dye)

Hieff Canace® Gold 高保真酶，高保真PCR的最in之选

精品反馈！高保真酶，超高保真随心扩！

翌圣高保真酶，分子克隆的不二之选

耐dUTP高保真酶,助力DNA甲基化测序

翌圣高保真酶——让序列扩增不再困难

翌圣生物Canace®系列高保真-快速高保真，5sec/kb，保真保快！

400-6111-883

52倍Taq高保真预混液2×Hieff Canace^® Gold PCR Master Mix

(10136ES) 2× Hieff Canace^® PCR Master Mix 高保真酶预混液

(10106ES) 2×Hieff^® Robust PCR Master Mix(With Dye)