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产品描述
2× Hieff Canace® PCR Master Mix是即用型2×预混合溶液，包含Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系。Hieff Canace® High-Fidelity DNA Polymerase是新一代的高保真DNA聚合酶，具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。扩增速度可达15 sec/kb。适用于复杂模板的扩增，扩增产物为平末端。
2× Hieff Canace® PCR Master Mix具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，反应体系只需加入引物和模板即可进行扩增，简化了实验操作步骤，减少了人为误差，提高了实验通量和结果的重复性。本产品中不含染料，PCR产物需加入Loading buffer 后进行电泳。另外，该产品还含有特异保护剂，使得预混液反复冻融后仍可维持稳定活性。
产品应用
基因克隆；复杂DNA模板扩增；高通量建库。
运输与保存方法
冰袋运输。-20℃保存。有效期2年。
注意事项
1）为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
2）本产品仅作科研用途！
推荐PCR反应体系（冰上配制）
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组分 |
体积 |
终浓度 |
|
ddH2O |
to 50 μL |
- |
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DNA模板 |
适量 |
- |
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Primer正向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
|
Primer反向 (10 μM) |
2.5 μL |
0.5 μM |
|
2× Hieff Canace® PCR Master Mix |
25 μL |
1× |
【注】：
1）聚合酶终浓度：在1×预混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反应体系中引物终浓度的范围为0.2-1 μM，推荐0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP终浓度：在1×预混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）高GC模板：在体系中加入终浓度为3%的DMSO可能有利于扩增。
5）不同模板的推荐使用量（50 μL反应体系）：
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模板种类 |
扩增片段1 kb-20 kb |
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基因组DNA |
50 ng-200 ng |
|
质粒或病毒DNA |
10 pg-20 ng |
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cDNA |
1-5 μL (不超过PCR反应总体积的1/10) |
PCR扩增程序设置
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循环步骤 |
温度 |
时间 |
循环数 |
|
预变性 |
98℃ |
0.5-3 min |
1 |
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变性 |
98℃ |
10 sec |
30-35 |
|
退火 |
60℃ |
20 sec |
|
|
延伸 |
72℃ |
15-30 sec/kb |
|
|
终延伸 |
72℃ |
5 min |
1 |
【注】：
1）预变性温度和时间：推荐使用98℃。预变性推荐时间：质粒DNA等简单模板为30 sec；cDNA、基因组DNA等复杂模板为3 min；高GC含量模板为5-10 min。
2）退火温度和时间：推荐使用60℃，也可根据需要，设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20 sec，可以在10-30 sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
3）延伸温度和时间：推荐使用72℃。延伸时间推荐如下：质粒DNA等简单模板为15 sec/kb；cDNA、基因组DNA等复杂模板为30 sec/kb，根据实际情况可延长至40 sec/kb。
4）扩增产物：请将PCR扩增产物放置于-20℃保存，防止该酶降解扩增产物。扩增产物为平末端，产物直接用于克隆，请使用平末端连接载体。
应用实例
图1： Hieff Canace® 高保真PCR预混液扩增2.1 kb-6 kb目的片段。所有基因片段均可实现高特异性、高产量扩增。模板：拟南芥基因组DNA，50 ng/50 μL；退火温度：60℃；延伸时间：30 sec/kb。M：1 kb ladder； 1：2.1 kb；2：3.1 kb；3：4.2 kb；4：5 kb；5：6 kb。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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10135ES60/76/80 |
100/500/1000 U |
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10907ES20 |
20 T |
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10908ES20 |
20 T |
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10909ES20 |
20 T |
|
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10910ES20 |
20 T |
|
|
10911ES20 |
20 T |
|
|
10912ES10 |
10 T |
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11003ES10 |
10 T |
|
|
11004ES10 |
10 T |
HB210831
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