Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase基于Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase，经基因工程改造而成。该酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。酶溶液中添加了热启动因子，极大提高了扩增的检出率和产物的特异性。酶溶液中添加了延伸因子使得该酶具有长片段扩增能力，扩增速度达到15 sec/kb，扩增目的片段的长度可长达10 kb。本产品配备了优化缓冲液，添加了PCR增强组分，使得该酶适用于复杂模板的扩增。扩增产物为平末端。

产品组分

• 保真性高：Taq酶的52倍，Pfu酶的6倍。
• 特异性好：目的条带单一。
• 延伸速度快：可达15 sec/kb，极限速度1 sec/kb。
• 灵敏度高：可扩增低至1 pg模板。
• 适用性广：适合不同长度，不同GC含量模板的扩增。

• 高特异性：目的条带单一

图. 5种品牌的高保真DNA聚合酶扩增2 kb，4 kb的小鼠gDNA。Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶与同类产品对比，显示出更高的特异性和产量。Y：Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶；A-E：其他品牌的高保真DNA聚合酶；M：1kb DNA Marker。

• 延伸速度快：可达15 sec/kb，极限速度达1 sec/kb

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶分别扩增小鼠gDNA 2 kb和水稻gDNA 3 kb片段。不同延伸速度（1-60 sec/kb）都可有效扩增。M：1kb DNA Marker。

• 灵敏度高：可扩增低至1 pg模板

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶扩增质粒3 kb片段，不同模板量（1 pg-0.5 μg）都可有效扩增。NC：阴性对照。M：1kb DNA Marker。

• 适用于不同GC含量片段的扩增

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶对不同GC含量（30-70%）片段都可高效率的进行扩增。M：1kb DNA Marker。

• 适用于不同长度片段的扩增

图. Hieff Canace® Gold高保真DNA聚合酶对不同模板、不同长度（1-12 kb）片段都可高效率的进行扩增。M：1kb DNA Marker。模板：1-3：拟南芥gDNA，4-6：水稻gDNA，7-9：小鼠gDNA，10：人cDNA，11-18：人gDNA，19-21：质粒DNA，22：λDNA。

冰袋运输。-20℃保存，有效期2年。

Q：Canace 具有保真性的原理是？错配率是多少？能保证不突变吗？

A： a）原理是具有 3’-5’的核酸外切酶活性，即有校正功能。 b）Taq 酶错配率：2*10-4，0.0002，大约5kb 有一个碱基发生突变。Canace 约0.00039%，是 taq 酶的 52 倍。 c）高保真酶是突变概率低，但不是绝对的不突变。

Q：Canace 扩增后是平末端产物，如何加 A 尾？

A：仅供参考：先对平末端PCR 产物纯化后，浓度要求至少 20ng/ ul（跑胶图像条带清晰，明亮即可），取 14.5 ul PCR 产物，加入 2 ul Taq Buffer，3ul dNTP，0.5 ul Taq酶，在 72℃反应 10~20min, 后直接回收纯化加A 尾的DNA 片段。

Q：Canace 能否用于 XX 长度的片段？

A：验证范围内长度理论上是可以的（验证范围：简单模板 20kb，复杂模板 10kb）。但具体能否扩出，还与模板和引物等有关。

Q：产物突变？

A：原因 1：模板突变。 1.原始模板序列有突变。 原因：原始模板序列有突变会使扩增产物的突变位点恒定，表现在多个克隆测序发生突变，且突变位置恒定。 判断方法：将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序，测序结果与模板序列对比，发生突变且位置恒定，可认为是模板序列发生突变。

优化方法：更换序列正确的模板。

2.保存不当突变。

原因：反复冻融或长时间紫外照射可能导致模板发生断裂或突变，突变位置不定。

判断方法：将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序，测序结果与模板序列对比，发生突变且位置不定，可认为是因保存不当导致模板发生了突变。

优化方法：尽量减少模板的反复冻融或紫外照射。

原因 2：酶保真性差。

DNA 聚合酶保真性差，导致突变的概率大，在长片段扩增中更常见。

判断方法：将模板与 T 载体连接产生的克隆送测序，模板不突变。以模板扩增得到的产物进行克隆测序后发生突变，且突变位置不恒定，可认为是 PCR 过程中发生的突变， 常是由于酶保真性差导致。

优化方法：更换成保真性更高的产品。注：保真性高低代表突变概率的高低，保真性再高的产品均不能完全避免突变。