蛋白电泳经常使用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE凝胶)来实现蛋白分离,此类凝胶一般由浓缩胶和分离胶两部分组成,前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用,后者则是根据凝胶所使用的丙烯酰胺单体和N,N-亚甲基双丙烯酰胺(甲叉丙烯酰胺)交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。
本试剂盒适用于Tris-甘氨酸电泳体系,其中包括快速制备PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶设备即可配胶,大大简化了制胶过程,此外,本品还具有以下特点:
1)制胶速度快——最少仅需2 min即可灌制多块凝胶,无需计算所需溶液量,无需稀释;
2)彩色浓缩胶——浓缩胶呈彩色,为点样提供最大便利,所含颜色配方不影响电泳、染色及转膜等后续应用;
3)安全无异味——无需使用TEMED,避免接触过硫酸铵粉末,远离有毒试剂;
4)稳定性高——试剂盒配套提供的硫酸铵催化剂溶液属改良型APS,其稳定性和催化效能都得到大大提升。
5)一步法灌胶——可无需封闭分离胶,直接添加浓缩胶(请熟读配胶步骤)。
本试剂盒所配制凝胶可用于变性PAGE凝胶电泳,也可用于非变性PAGE凝胶电泳。该规格可配制不同厚度的凝胶,配制数量分别为:0.75 mm厚度胶(约125块)、1.00mm厚度胶(约90块)、1.50mm厚度胶(约60块)。
翌圣为您提供Western Blot实验整体解决方案,相关产品选购请参考:WB实验系列产品-选购指南
【试剂盒操作指南视频】
产品信息
类别 |
编号 |
组分名称 |
20325ES62(125 mini gels) |
保存方式 |
Part Ⅰ |
20325-A |
10%-分离胶缓冲液 |
250 mL |
2~8℃ |
20325-B |
10%-分离胶溶液 |
250 mL |
2~8℃ |
|
20325-C |
10%-彩色浓缩胶缓冲液 |
80 mL |
2~8℃ |
|
20325-D |
10%-浓缩胶溶液 |
80 mL |
2~8℃ |
|
20325-E |
制胶杯 |
3个 |
2~8℃ |
|
Part Ⅱ |
20325-F |
改良型过硫酸铵溶液 |
8 mL |
-25~-15℃ |
储存条件
2~8℃保存。其中F组分改良型过硫酸铵溶液如果长时间不用,需保存于-25~-15℃。有效期1年。
使用说明:建议配胶时不要一次性配置太多块胶,避免来不及添加上层液(推荐最多2-3块)
1 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度【参考附表1】
2 制胶流程(以一块0.75/ 1.0/ 1.5 mm的胶为例)
1)取等体积分离胶缓冲液和分离胶溶液混匀,即取两种溶液各2.0/ 2.7/ 4.0 mL。
2)往步骤1中的混合溶液中加入40/ 55/ 80 μL的改良型过硫酸铵溶液(凝固太快可减半过硫酸铵使用量),充分混匀。
3)将步骤2中的溶液注入制胶玻璃板中。注意加入分离胶后要在2 min内将浓缩胶注入凝胶模具内,且在灌注浓缩胶时要缓慢,防止浓缩胶与分离胶混合在一起。如果个人觉得配置困难,也可改编为自行用乙醇封闭之后再进行配置浓缩胶。
4)浓缩胶的配置:取等体积浓缩胶缓冲液和浓缩胶溶液混匀,即取两种溶液各0.5/ 0.75/ 1.0 mL,然后加入10/ 15/ 20 μL的改良型过硫酸铵溶液,充分混匀。
5)注入制胶玻璃板中,插入梳齿(插胶梳时切勿用力过猛,轻轻插入)。
6)待15 min浓缩胶凝固后,拔去梳齿即可用于电泳。注:请尽量使用新鲜配置的电泳缓冲液。
注意事项
1. 建议电泳时电压在100-120V之间,如需要加快电泳速度,可增加至150V。
2. 灌胶前,务必将凝胶溶液及缓冲液平衡到室温(如室温放置几分钟),可有效避免凝胶中气泡的形成。
3. 过硫酸铵溶液(改良型)的使用量仅作参考,实际用量可根据个人实验习惯和经验增加或减少。加入较多量的过硫酸铵可加快凝胶速度,反之亦然。PAGE凝胶的凝聚速度与温度和过硫酸铵的用量密切相关。
4. 本产品已加入适量TEMED的替代品,如需进一步加快凝胶速度,临配胶前可按需补充适量TEMED。
5. 胶的凝固与温度有显著的正相关性。同等条件下,温度越高,凝固速度越快。
6. 彩色浓缩胶在储存过程中可能会产生少量沉淀,属正常现象,请放心使用。使用前请轻柔混匀。
7. 改良型过硫酸铵溶液保存于-25~-15℃。为方便吸取使用,建议分装保存,已开盖使用中的过硫酸铵溶液可置于2~8℃保存。
8. 本产品仅作科研用途!
9. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
附表1. 不同浓度SDS-PAGE分离胶参考分离范围
SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围(kDa) |
8%凝胶 |
30-200 |
10%凝胶 |
20-80 |
12.5%凝胶 |
15-60 |
15%凝胶 |
10-45 |
Ver.CN20230620