ssDNA Assay Kit 是一种简便、灵敏、精确的单链 DNA（ssDNA)荧光定量检测试剂盒，在 1~200 ng 区间具有良好的线性关系。本试剂盒包含荧光检测试剂、缓冲液及相关的 ssDNA 标准品，使用前先将荧光检测试剂用缓冲液稀释成工作液，然后加入待测 ssDNA 样品，即可使用荧光酶标仪或 Qubit荧光仪进行读数。试剂盒对单链 DNA 的选择度并不高于双链DNA，但它对常规的污染物如蛋白质、盐类物质、洗涤剂等具有较好的耐受性。搭配Qubit@荧光仪进行ssDNA定量检测分析见操作说明书，如需匹配酶标仪，使用说明如下：

翌圣Qubit定量系列匹配酶标仪使用说明及注意事项

参数设置

1. 使用荧光酶标仪进行ssDNA定量检测分析（Cat#12645）

注意事项：

① 使用前各组分需要充分平衡至室温，ssDNA染料呈现完全的溶解状态；

② 为简便起见，以下操作说明中以10μl的ssDNA样品为例，但是实际应用中应根据ssDNA样品的浓度选择合适的体积（一般情况下待测的ssDNA样品体积范围为1~20μl），然后调整检测工作液的体积，使整个检测体系的总量为200µl。

③ 如待测样品浓度高于200ng/μl，请进一步稀释样品后再进行检测，否则会影响结果的准确性。

④ 推荐使用黑色的酶标板，如Greiner或Corning公司的黑色96孔酶标板，可有效降低反应孔之间的荧光干扰。但不同酶标仪的配置不同，酶标板选择时需要和根据仪器选择若检测需要透过酶标板检测，则应选则底部透光性良好的酶标板。具体可咨询荧光酶标仪厂家确定。

⑤ 不同酶标仪参数不同，最终测量体系可能需要根据具体所使用的的荧光酶标仪进行调试。

⑥ 绘制标准曲线时，ssDNA标准品进行浓度梯度稀释时须至少设置5个梯度，且待测ssDNA样品的浓度须介于稀释标准品的浓度区间范围内，以保证检测结果的准确性。

⑦ 试剂盒中的染料激发波长为500nm,发射波长为530nm，在使用荧光酶标仪时建议将激发波长设置为485nm，发射波长设置为530nm，以降低背景信号，使结果更准确，具体根据所使用的的荧光酶标仪型号调试。

实验步骤

(1) 在使用前，将试剂盒中的各组份放至室温。检查ssDNA Reagent（组分12645-A）是否结冰或沉淀，若有，可将该试剂至于37℃水浴锅中温育，并轻柔混匀至完全溶解。

(2) 制备检测工作液：使用ssDNA Buffer按比例将适量ssDNA Reagent稀释至1×（例：一个反应取1μL ssDNA Reagent，加入199μL ssDNA Buffer)。

(3) 向96孔酶标板中加入新鲜配制的检测工作液，每孔190µl。

(4) 标准曲线制作：取试剂盒中的ssDNA Standard＃2（组份12645-D），使用ssDNA Standard1或TE Buffer按浓度梯度进行稀释，制成至少5个梯度的稀释的ssDNA标准品。（也可使用已知浓度的ssDNA样品）

(5) 向96孔酶标板中加入梯度浓度的ssDNA标准品或待测的ssDNA样品，每孔10µl，并分别设置1-2个复孔，加入后用移液枪轻轻地吹打混匀。

(6) 将酶标板至于室温环境下避光孵育2分钟。

(7) 使用荧光酶标仪检测荧光信号值，选择合适的检测波段：激发波长(Ex)设置为485nm，发射波长(Em)设置为530nm。

(8) 利用测得的梯度浓度标准品的荧光信号值与对应的核酸投入量绘制标准曲线，将未知浓度的待测样本测得荧光信号值代入标准曲线中即可得待测样本核酸总量，根据待测样投入体积可计算出核酸浓度。

信号稳定：优异的染料加上升级优化的Buffer，可室温下维持稳定的荧光强度，在常见污染，如盐、自由核苷酸、溶剂、去污剂或蛋白质等环境下仍有很强的适用性，定量准确；

高灵敏度：检测浓度低至50 pg/μL；

快速准确：使用操作流程简单，实现寡聚核苷酸、引物、变性DNA、单链环状DNA等的快速定量。

1.良好的线性

2.定量结果准确性

3. 污染物耐受性

2~8℃保存，有效期1年。