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Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNA(dsDNA)定量试剂

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qubit试剂搭配酶标仪操作流程

产品描述

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，其仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，因而可用于精确测量多个来源的dsDNA，包括基因组DNA、病毒DNA、PCR扩增产物、测序文库等。

本产品Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：可检测低至200 pg的dsDNA，节省宝贵样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

 

运输和保存方法

室温运输。-20℃避光密封保存，有效期2年。

 

注意事项

1. Picogreen定量试剂含有DMSO（已知有毒试剂），请小心操作；

2. 尽管目前尚未有数据表明Picogreen具有诱变性和毒性，但是该试剂能结合双链DNA，请操作时务必小心；

3. 为了您的健康，实验操作时请穿实验服和戴一次性手套。

4. 本产品仅用作科研用途！

 

应用实例

【注】：本方法参照2010《中国药典》进行操作。

1．染料工作液的配置

PicoGreen dsDNA定量试剂取出后回温至室温，该试剂是以100 µL 200×的浓缩液形式保存于无水DMSO中的。实验当天，根据实验用量用1×TE（10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，pH 7.5）按1:200 的比例稀释PicoGreen浓缩液。

【注】：1）由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。

2）PicoGreen试剂见光易降解，所以应将配好的溶液用铝箔包住或放置暗处避光保存。

3）溶液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。

2．标准品工作液的配制

取λDNA标准品，用无菌TE buffer配制成100 μg/mL的标准品工作液。

【注】：标准品也可用其他已知浓度的纯化DNA；有一些产品描述可使用小牛胸腺DNA作为标准品，按照我们实际操作经验，并不推荐它作为标准品。

 

3．标准品工作液稀释

1) 母液稀释：使用TE缓冲液将100 μg/mL的标准品稀释为2 μg/mL。

2) 梯度稀释：参照表1，对DNA标品母液进行梯度稀释。

表1 标曲制作

TE体积（μL）

2 μg∕mL DNA标准品母液（μL）

Picogreen染料工作液（μL）

DNA标准品终浓度

0

1,000

1,000

1 μg/mL

900

100

1,000

100 ng/mL

990

10

1,000

10 ng/mL

999

1

1,000

1 ng/mL

1,000

0

1,000

Blank

 

3) 标准曲线的制备：向经稀释的各梯度标准品溶液中加入1 mL染料工作液混匀，避光室温孵育5 min。使用酶标仪或荧光计检测荧光强度（Ex=480 nm，Em=520 nm）；将溶液加入比色皿或取200 μL加入微孔板，确信不要在样品中引入气泡；以1×TE缓冲液空白对照，测定标准品荧光值；用标准品溶液的浓度（ng/mL）对应的荧光强度作直线回归，制备标准曲线。

4) 测量剩余样品的荧光值：荧光计将给出一个直接的浓度读数，数据可以用来产生DNA浓度的标准曲线。

HB220615

 

400-6111-883