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解决方案 | NGS定量产品一站式解决方案

 

核酸质控作为分子生物学最基础的实验之一，核酸定量的准确与否直接决定着下游实验的结果。目前市面上在用的核酸定量方法主要是紫外光吸收法和Qubit荧光染料法。

 

紫外光吸收法利用分光光度计测定260nm处的吸光度，对DNA和RNA进行定量。与此同时，还能通过计算OD260/OD280估计核酸的纯度，但检测数值极易受到其他污染物(如游离核苷酸、盐和有机化合物)的影响。

 

Qubit荧光染料法利用荧光染料特异地与双链DNA、单链DNA、RNA或蛋白质相结合，并在特定波长光源的激发下，发出荧光，并不受样本中可能存在的其他杂质分子影响，荧光强度与样品中的靶分子浓度相对应。

 

表1.核酸定量主流方法比较

 

紫外吸收法与qubit荧光法定量各有优势，互相配合。针对常规核酸样本初步定量浓度纯度和是否存在污染物等信息可选择吸光度法定量，Qubit定量更适合低浓度的珍贵样品或需要精确定量的下游实验，如二代测序、荧光定量PCR等。

 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

翌圣已推出多款Qubit定量产品：dsDNA HS Assay Kit for Qubit®（Cat#12640）、预混即用型1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®(Cat#12642）、单链DNA定量试剂盒ssDNA Assay Kit for Qubit®（Cat#12645）和dsDNA BR Assay Kit（Cat#12643），自上市以来广受好评。

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 

 

 

方案 1
dsDNA HS高敏型定量

即用型dsDNA定量预混液--1×dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

 

 

 

  • 操作简便：即用型预混液，无需预混；

  • 高灵敏度：检测浓度低至50 pg/μL；

  • 稳定性好：荧光信号持续3 h，常温放置20 d不影响定量准确性；

 

A. 超强稳定性：室温存放2周仍保持稳定（测定值与理论值偏差<10%）

 

表2.对比竞品，不同样本4℃和室温稳定性测试

 

B. 灵敏度高，批间稳定性良好

 

表3.不同批次稳定性测试

 

 

方案 2
dsDNA BR宽范围定量

宽范围dsDNA定量--dsDNA BR Assay Kit

 

 

  • 高灵敏度：检测浓度低至50 pg/μL；

  • 线性关系表现佳：2-1000 ng范围内，线性关系良好

  • 污染物耐受性强：可耐受常见污染物。

 

表4.对比竞品，标准品稳定性和耐受污染物测试

 

 

方案 3
ssDNA 定量

ssDNA定量的理想之选——高性价比ssDNA Assay Kit for Qubit®

 

 

  • 高灵敏度：检测浓度低至50 pg/μL；

  • 线性关系表现佳：0-200 ng范围内，线性关系良好；

  • 信号稳定：优异的染料加上升级优化的Buffer，可室温下维持稳定的荧光强度，在常见污染，如盐、自由核苷酸、溶剂、去污剂或蛋白质等环境下仍有很强的适用性，定量准确；

  • 稳定性好：4℃、25℃处理6个月，性能无明显变化；

  • 应用范围广：使用操作流程简单，实现寡聚核苷酸、引物、变性DNA、单链环状DNA等的快速定量。

 

A. 重复性好：在不同的Qubit仪器中进行定量，不同类型的样品使用翌圣多个批次的Cat#12645测试。0-200ng范围内，不同Qubit仪器测量重复性好。

 

图1.不同批次在不同qubit仪器稳定性测试

 

B.稳定性良好：标准品和1×工作液稳定性测试，37℃放置10天，荧光信号稳定。长期稳定性监测25℃储存6个月，产品性能于4℃对照一致。

 

表5. 标准品和待测样本稳定性测试

 

方案 4
qPCR法文库定量

 

 

  • 定量准确：检测试剂扩增效率高，特异性好，在0.0002 pM～20 pM范围内均有很好的线性关系；

  • 仪器兼容性广：兼容常规定量平台，如Bioer平台、Bio-Rad平台和ABI 7500平台；

  • 稳定性好：4℃、25℃处理6个月，性能无明显变化。

 

图2.不同厂家文库定量试剂定量情况

 

 

翌圣定量产品经过严格的出厂质控标准，保证稳定准确定量，让您定量无忧！

 

表6. 翌圣NGS定量产品选择指南

产品类别

产品名称

货号

定量范围

dsDNA HS

dsDNA HS Assay Kit for Qubit®

12640ES

0.2-100 ng；

10 pg/µL-100 ng/µL

Picogreen dsDNA Quantitation Reagent 双链DNA（dsDNA）定量试剂

12641ES

1×dsDNA HS Assay Kit

12642ES

dsDNA BR

dsDNA BR Assay Kit

12643ES

2-1000 ng；        0.1 ng/µL-1000 ng/µL

ssDNA qubit

ssDNA Assay Kit for Qubit®

12645ES

1–200ng；

50 pg/μL-200 ng/μL

qPCR法文库定量

Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, qPCR Master Mix

12302ES

定量预混液

 

Hieff NGS® Library Dilution Buffer

12303ES

文库稀释液

Hieff NGS® Library Quantification Kit for Illumina, DNA Standard (1-6)

12307ES

定量标准品

400-6111-883