产品说明书
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COA
已发表文献
细菌内毒素可引起机体免疫功能受损，严重者可引发脓毒性休克，急性呼吸窘迫综合症，弥散性血管内凝血，全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭等。因此对于用于疾病治疗的基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品必须通过一定的方法去除内毒素。
本试剂盒使用一类高效内毒素去除树脂，它以生物安全性极高的内毒素特异吸附物质为配体，经此亲和树脂纯化，样品最终的内毒素水平可＜0.1EU/ml。而且经过亲和纯化后没有对人体有毒害物质残余，适合抗体、疫苗等生物制品的内毒素去除。
产品性质
亲和树脂的主要特征：
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规格 |
1.5 mL预装柱 |
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结合能力 |
高达1,800,000 EU/mL树脂 |
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配基 |
高效内毒素特异吸附配基 |
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PH范围 |
pH 5-10 |
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基质 |
4%交联的琼脂糖凝胶 |
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颗粒大小 |
80-100 µm |
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离子范围 |
0.1-0.5M NaCl |
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保存温度 |
2℃-8℃（勿冷冻） |
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使用寿命 |
18个月 |
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适合纯化对象 |
蛋白，多肽，抗体，多糖等 |
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耐受试剂 |
20% DMSO，20% 乙醇，20% 甘油；0.05% 吐温-20，10 mM DTT；1 M 尿 素；300 mM 咪唑等 |
产品组分
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编号 |
组分 |
规格 |
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60404-A |
亲和树脂预装柱 |
1.5 mL |
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60404-B |
再生缓冲液 |
100 mL |
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60404-C |
平衡缓冲液 |
100 mL |
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60404-D |
流速控制器 |
1个 |
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60404-E |
无热原接收管 |
2包（3支/包） |
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60404-F |
无热原枪头（1 mL） |
10包（4支/包） |
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60404-G |
保护液（20%乙醇） |
50 mL |
运输储存方法
冰袋运输。4℃保存，有效期2年。
注意事项
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅作科研用途。
使用方法
需另外准备的设备与试剂
1）铁架台；2）3 M的NaCl、0.1M的NaOH和0.1 M的HCl，用于调节样品pH值和离子强度。
1. 样品处理：样品在上样前建议离心或用0.22 µm或0.45 µm滤膜过滤，减少杂质，提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。
实验中存在的若干因素都可能会影响内毒素去除效率，如：缓冲液的pH值，内毒素浓度，内毒素与树脂的接触时间，离子强度，温度以及样品的特性等。其中样品pH值和离子强度对于内毒素的去除效率影响尤其重要，纯化前可用处理过的氯化钠，0.1 M的NaOH或0.1 M的HCl来调节离子强度或pH值。
【注】：
① 虽然结合内毒素的pH范围在5-10，但是7-8的pH范围是纯化的最佳范围。
② 合适的离子浓度可降低非特异性吸附，保持0.15-0.5 M NaCl的条件可以得到一个较好的去除效果。
2. 活化树脂：将预装柱置于铁架台，垂直固定，去除顶部盖子，打开流速控制器，使保护液在重力作用下流干，加入5 mL
再生缓冲液（预冷），调节流速控制器，保持流速在0.25 mL/min（或1滴/6s），待再生缓冲液流干后再加入5 mL再生缓冲液（预冷），再重复操作2次，确保体系保持无热原存在。即使是第一次使用也必须进行这一步操作。该步操作大约需要60 mins完成。
3. 平衡树脂：活化完毕后加入6 mL的平衡缓冲液（预冷），沿柱管内壁均匀加入其中，保证清洗柱管的内壁，调节流速控制器，保持流速在0.5 mL/min（或1滴/3s），流干平衡缓冲液，再按此操作重复2次。这步操作大约需要40 mins完成。
4. 内毒素去除：取1.5 mL样品加到平衡后的层析柱中，调节流速在0.25 mL/min（或1滴/6 s），不接收流出液。当样品流
完，继续添加样品，样品可以加满柱管，同时收集流出液，即为除热原的样品。为了降低样品的损失，样品流完后，再添加1.5 mL平衡液，并与之前的流出液合并。检测样品浓度及内毒素水平。
5. 再次使用：如果流出样品内毒素水平未能达到预期值，需要将预装柱按照步骤2、3重新再生、平衡，然后上样纯化。
6. 保存条件：如果预装柱用完后需要保存，先用5 mL平衡缓冲液（预冷）平衡柱子，待平衡液流完，加入6 mL的保护液并于4 ℃保存。
附表 问题与解答
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问题 |
可能原因 |
解决方法 |
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去除效率低 |
样品与树脂接触时间太短 |
降低样品流速，或通过低温孵育来提高结合效率 |
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样品的 pH 值没有在内毒素结合范围内 |
用0.1 M的NaOH或0.1 M的HCl调节pH值至7-8 |
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去除或检测系统受到外来因素污染 |
使用无热原的实验仪器，保证体系不受污染 |
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内毒素与目的蛋白结合太牢固 |
① 优化样品的 pH 值，使它们解离； ② 增加样品与树脂的接触时间 |
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样品损失高 |
样品通过非特异性作用结合在树脂上 |
增加样品和平衡缓冲液中NaCl的含量 |
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目的蛋白与内毒素结合牢固，一起结合在树脂上 |
① 优化样品的pH值，使它们解离； ② 增加样品与树脂的接触时间 |
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样品被污染 |
树脂用于处理过其他的样品 |
尽量避免使用同一个预装柱处理不同样品。如果无法避免，可以在处理一个样品之后，用10-20 mL 2 M NaCl淋洗树脂，然后再处理另外一种样品 |
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再生缓冲液出现浑浊 |
当再生缓冲液达到室温时会出现浑浊 |
使用前在冰上冷却再生缓冲液或者在4℃条件下进行再生 |
HB221107
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