根据国家实验室用水标准(GB/T 6682-2008),实验用水主要分为三种:一级水,适用于有严格要求的分析实验;二级水,适用于常规实验室分析实验;三级水,适用于一般的实验室清洗、器皿冲洗、和非高要求试剂配制等。除国家实验室用水标准(GB/T 6682-2008)的常规指标外(如pH值范围、电导率、比电阻、可氧化物等),由于不同实验的多项需求,实验室用水还涉及,如热源、有机物、颗粒、微生物和核酸酶等其他水质指标。
高等级实验室用水
水的质量是生物实验试剂配制或者实验操作成功的前提,同时也直接决定后续试剂的稳定性与实验重复性。
翌圣高等级实验室用水系列产品专为高要求生物实验服务,包括细胞培养用注射用水、DEPC处理水、无酶无菌水、无菌去离子水、超纯水和蒸馏水,可覆盖绝大多数生物实验中的用水需求。本系列产品其核心在于去除水中杂质的干扰,如离子、有机物、微生物、内毒素等。
Water For Injection (WFI) for Cell Culture 细胞培养用注射用水
特征:无菌,总有机碳(TOC)≤0.50 mg/L,不挥发物(Non-volatile matter)遗留残渣不得过1 mg,内毒素(Endotoxin)<0.25 EU/mL。
工艺:采用纯化水,经多重蒸馏及灭菌后获得。
应用:可用于细胞培养以及实验室中其它各种高纯度溶液的配制等。
Sterile Deionized Water (PCR Grade) 无菌去离子水(PCR级)
特征:无核酸酶,无菌,但仍然存在可溶性的有机物,比如热原等。
工艺:通过离子交换树脂或RO反渗透法制取去离子水,并通过0.1 μm滤膜过滤除菌。
应用:适用于PCR等分子生物学实验中各种缓冲液和溶液的配制。
Nuclease-Free Water (not DEPC-Treated) 无酶无菌水(未经DEPC处理)
特征:无核酸酶(DNase/RNase-free)、无蛋白酶(Protease-free)、无细菌(bacteria-free)、无DEPC。
工艺:采用纯化水,经多重蒸馏及灭菌后获得。
应用:适用于分子生物学研究中RNA或DNA相关以及对DEPC敏感的各种实验操作(如卵母细胞注射),也可用于实验室中各种高纯度溶液的配制。
特征:无菌,水内大部分的污染物被去除。
工艺:通过饮用水一次蒸馏获得的纯水。
应用:基础化学实验、非精密仪器清洗。
特征:电阻率>18 MΩ.cm (25℃)、电导率<0.0556 μS/cm 25℃)、总有机碳≤5 ppb、颗粒(>0.22 μm)<1颗粒/mL、细菌<0.1 cfu/mL、不解离的胶体物质、气体及有机物均去除至极低水平。
工艺:采用先进的反渗透技术,辅以标准大容量精制柱等多种离子交换柱、紫外光氧化装置等设备,经过终端过滤器而生产。
应用:高精度分析、细胞培养、分子生物学关键实验(DNA测序)
DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase )
特征:不含RNase、DNase和proteinase,基本生不含DEPC的超纯水。
工艺:0.1%DEPC处理过并经高温高压消毒。
应用:可以用于RNA沉淀的溶解,含有RNA的各种反应体系如反转录、siRNA的退火等,以及其它各种要求无RNase、DNase和proteinase的反应体系。
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产品货号 |
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UltraPure Water超纯水 |
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DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水(无DNase、RNase ) |
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Water For Injection (WFI) for Cell Culture细胞培养用注射用水 |
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Sterile Deionized Water (PCR Grade)无菌去离子水(PCR级) |
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Nuclease-Free Water (not DEPC-Treated)无酶无菌水(未经DEPC处理) |
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Distilled Water蒸馏水 |
细胞培养基及相关试剂
细胞培养基是细胞生长和繁殖的必需介质,提供细胞所需的营养物质、生长因子、无机盐和缓冲系统。选择合适的培养基对于细胞培养的成功至关重要。另外,为进一步优化和调整细胞状态,我们需要根据不同细胞的特性,加入抗生素、细胞因子、血清白蛋白等添加剂。
注:为避免细胞受到细菌、真菌和病毒等污染物以及受到金属离子、内毒素的直接或间接影响,在细胞培养过程中,制备相关缓冲液或试剂应至少使用无菌二级以上实验用水,最佳选择是使用无热源一级实验用水。水不仅是缓冲液和介质的主要成分,而且还用于溶解添加剂和药物等关键物质。
1.细胞培养基
1)基础培养基
基础培养基(如DMEM、RPMI-1640)主要成分是细胞必需的氨基酸(如谷氨酰胺)、维生素(如维生素B族)、无机盐(如Na⁺、K⁺),和其它一些辅助物质。为细胞提供能量代谢与结构合成的“基础原料”。使用时还需添加一定量的血清使细胞保持良好的生长状态。基础培养基的种类有很多,其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12是应用较为广泛的。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。
RPMI 1640培养基McCoy's 5A培养基的改进型,使用碳酸氢盐缓冲系统,与其它培养基的区别在于含有还原型谷胱甘肽和高浓度的维生素。RPMI 1640培养基含有EMEM和DMEM中没有的生物素、维生素B12和对氨基苯甲酸,以及高浓度的氯化胆碱和肌醇。RPMI 1640培养基最初开发用于人白血病细胞的悬浮或单层培养,后来被发现也适用于多种哺乳动物细胞,包括HeLa、Jurkat、MCF-7、PC-12、PBMC、星形胶质细胞和癌细胞,尤其适用于悬浮细胞的培养,是使用最为广泛的培养基之一。
DMEM是改良的Eagle基本培养基(BME),维生素和氨基酸浓度是BME的四倍,Ham's F-12是以Ham's F-10培养基为基础,提高了胆碱、肌醇、腐胺和几种氨基酸的浓度。DMEM/F-12(Dulbecco's Modified Eagle Medium/Nutrient Mixture F-12 Ham)是DMEM培养基和Ham's F-12培养基1:1的混合物,支持多种哺乳动物细胞的生长,包括神经胶质细胞、成纤维细胞、MDCK、人内皮细胞和大鼠的成纤维细胞等细胞的生长。
Dulbecco的改良Eagle培养基—DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是在MEM培养基的基础上研制的,与MEM培养基相比,氨基酸的含量增加了2倍,维生素增加了4倍,同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及丙酮酸钠,常适用于多种哺乳动物细胞培养,包括原代成纤维细胞,神经元,神经胶质细胞,HUVEC和平滑肌细胞,以及HeLa,293,Cos-7和PC-12等细胞系。DMEM培养基最初设计为葡萄糖含量1000 mg/L的低糖型,后来又发展出葡萄糖含量为4500 mg/L的高糖型,现已广泛应用于各种细胞的培养DMEM高糖型普遍应用于生长快、粘附性低的细胞、杂交瘤的骨髓瘤细胞、克隆细胞、DNA转染的转化细胞、原代病毒宿主细胞、单一细胞的培养以及疫苗的生产,例如利用CHO细胞表达EPO和生产乙肝疫苗。
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产品货号 |
产品名称 |
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DMEM/F-12 Medium (L-Glutamine,Sodium Pyruvate,Phenol Red,HEPES) DMEM/F-12培养基(含L-谷氨酰胺,丙酮酸钠,酚红,HEPES) |
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DMEM High Glucose Medium DMEM高糖培养基(含L-谷氨酰胺,丙酮酸钠110 mg/L;不含HEPES,双抗) |
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RPMI1640培养基(含L-谷氨酰胺;不含丙酮酸钠,HEPES,双抗) |
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2)减/无血清培养基
细胞体外培养时需要在培养基中加入血清,以维持细胞的生长和存活。而血清,尤其是牛血清,成分复杂、批间差大和存在病原体污染的可能性,不确定的动物源性对细胞培养会带来显著的外源物质污染风险,因此科研人员对减/无血清培养基的需求日益增加。
减血清培养基
减血清培养基是富含营养物质和动物源性因子的基础培养基配方,这些成分可补偿降低的血清浓度,在不影响细胞的生长速度和保持细胞形态不变的前提下,减少所用的血清量,同时也大大降低培养基成本。
Hieff®Optimal-MEM Reduced Serum Medium减血清培养基
Hieff® Optimal-MEM Reduced Serum Medium减血清培养基(转染专用,含酚红)是一种改良的最低必需培养基,添加了胰岛素、转铁蛋白、胸腺素、次黄嘌呤和多种微量元素,这些成分可补偿降低的血清浓度,在不影响细胞的生长速度和保持细胞形态不变的前提下,将胎牛血清的添加量减少至50%。适用于阳离子脂质转染试剂对核酸的包转(如与翌圣生物的脂质体核酸转染试剂40802ES、40805ES配套使用)和细胞瞬时转染,可用于各种贴壁和悬浮的哺乳动物细胞,包括CHO、BHK-21、HEK、Sp2和原代细胞等,等同于Thermo的Opti-MEM减血清培养基。
CelCulSF™ Adherent Cell Culture Medium(Serum-reduced)贴壁细胞减血清培养基
CelCulSF™ Adherent Cell Culture Medium(Serum-reduced)贴壁细胞减血清培养基是专门针对贴壁细胞设计开发的减血清培养基(使用时仅需添加2.0%血清)。相较常规培养方案,其培养方案在保持相同/略高目标蛋白表达情况下,减少80%血清用量。
DMEM/F-12 Reduced Serum Medium DMEM/F-12减血清培养基
DMEM/F-12减血清培养基是在经典DMEM/F-12的基础上额外添加了乙醇胺、谷胱甘肽、抗坏血酸、胰岛素、转铁蛋白、牛血清白蛋白以及微量元素,可用于在低血清状态下维持细胞的生长,应用于减血清哺乳动物细胞培养。使用前需添加胎牛血清和L-谷氨酰胺或丙氨酰-谷氨酰胺。由于不同种类的细胞对血清的依赖程度不同,建议针对不同细胞进行优化后以确定最终的血清浓度。与经典DMEM/F-12相比,在不影响细胞生长速率和形态的情况下,使用该配方可减少50~90%的血清用量,从而降低培养条件波动,延长同一批次血清使用的时间。
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CelCulSF™ Adherent Cell Culture Medium(Serum-reduced)贴壁细胞减血清培养基 |
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Hieff® Optimal-MEM Reduced Serum Medium 减血清培养基(转染专用,含酚红) |
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DMEM/F-12 Reduced Serum Medium DMEM/F-12减血清培养基 |
无血清培养基
无血清培养基是不需要添加动物血清或其他生物提取物,便可以维持细胞在体外较长时间生长、繁殖的一种合成培养基。它包含了血清的主要成分:粘附因子、生长因子、必需的营养物质和激素等,能减少血清本身的特性和批次间差异带来的不利因素,使细胞培养的条件更稳定。无血清培养基的优点由:成分确定,可以排除血清中未知成分以及外源因子的干扰,实验结果更为一致可靠;减少异源蛋白的引入,方便产物的分离纯化,提高安全性;细胞培养批次稳定性相较血清高,实验的可重复性以及重组蛋白的稳定性得到大幅提升。目前广泛应用于疫苗生产、单抗、活性蛋白等生物制品和细胞治疗等的领域中。
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产品货号 |
产品名称 |
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CelCulSF™ CIK Cell Culture Medium(Serum-free)CIK细胞无血清培养基 |
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CelCulSF™ NK Cell Culture Medium(Serum-free)NK细胞无血清培养基 |
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CelCulSF™ Mesenchymal Stem Cell(MSC)Culture Medium(Serum-free)间充质干细胞(MSC)无血清培养基 |
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CelCulSF™ Lymphocyte Culture Medium(Serum-free)淋巴细胞无血清培养基 |
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CelCulSF™ Hybridoma Cell Culture Medium(Serum-free)杂交瘤细胞无血清培养基 |
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CelCulSF™ 293 Cell Culture Medium(Serum-free)293细胞无血清培养基 |
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CelCulSF™ Insect Cell Culture Medium(Serum-free)昆虫细胞无血清培养基 |
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3)类器官培养基
类器官(organoids)是指利用干细胞、祖细胞、肿瘤细胞等在体外培养出的3D细胞培养物并具有一定的空间结构组织类似物。作为疾病模型,相比于传统2D疾病模型,类器官在阐明疾病的发展、稳态性和发病机理等与体内环境更加接近。类器官主要由成体干细胞或肿瘤样本在适宜的培养条件下构建。类器官培养基是一种无血清的、可应用于建立和支持成体干细胞和肿瘤干细胞源的类器官培养,所含特有组分及细胞因子使干细胞或组织在基质胶中迅速生长成类器官,整个过程稳定且迅速。翌圣Cebrary®系列类器官培养基产品特点有:
- 组分明确:组分明确,含酚红,不含血清;
- 安全性高:无有毒有害成分,适合类器官生长;
- 批次稳定性好:严格生产质检过程保证批次间性能稳定;
- 低内毒素:无菌过滤,内毒素含量<2 EU/ml;
- 污染物检测:经检测无支原体和细菌、真菌残留;
- 因子活性高:细胞因子活性高,类器官分化生长效果好。
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Cebrary® Intestinal Cancer Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肠癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Gastric Cancer Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠胃癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Lung Cancer Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肺癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Breast Cancer Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠乳腺癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Liver Cancer Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肝癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Pancreatic Cancer Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠胰腺癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Liver Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肝类器官生长培养基 |
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Cebrary® Lung Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Pancreatic Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠胰腺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Gastric Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠胃类器官生长培养基 |
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Cebrary® Ovarian Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠卵巢类器官生长培养基 |
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Cebrary® Kidney Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肾类器官生长培养基 |
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Cebrary® Colon Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠结肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Fetal Mouse) 胎鼠小肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Colon Organoid Growth Medium (Fetal Mouse) 胎鼠结肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Rat) 大鼠小肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Colon Organoid Growth Medium (Rat) 大鼠结肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Liver Organoid Growth Medium (Porcine) 猪肝类器官生长培养基 |
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Cebrary® Lung Organoid Growth Medium (Porcine) 猪肺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Porcine)猪肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Endometrial Organoid Growth Medium (Porcine) 猪子宫内膜类器官生长培养基 |
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Cebrary® Lung Organoid Growth Medium (Cat) 猫肺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Lung Organoid Growth Medium (Bovine) 牛肺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Liver Organoid Growth Medium (Bovine) 牛肝类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Bovine)牛肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Breast Organoid Growth Medium (Bovine) 奶牛乳腺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Sheep) 羊肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Breast Organoid Growth Medium (Sheep) 羊乳腺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Chicken) 鸡肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Llama) 骆驼肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Kidney Cancer Organoid Growth Medium (Human) 肾癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Bladder Cancer Organoid Growth Medium (Human) 膀胱癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Endometrial Cancer Organoid Growth Medium (Human) 子宫内膜癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® HNSCC Organoid Growth Medium (Human) 头颈鳞癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Colorectal Growth Medium (Human) 结直肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Colorectal Differentiation Medium (Human) 结直肠类器官分化培养基 |
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Cebrary® Gastric Growth Medium (Human) 胃类器官生长培养基 |
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Cebrary® Pancreatic Growth Medium (Human) 胰腺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Kidney Growth Medium (Human) 肾类器官生长培养基 |
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Cebrary® Lung Growth Medium (Human) 肺类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Growth Medium (Human) 小肠类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Differentiation Medium (Human) 小肠类器官分化培养基 |
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Cebrary® Prostate Cancer Organoid Growth Medium (Human) 前列腺癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Pancreatic Cancer Organoid Growth Medium (Human) 胰腺癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Cancer Organoid Growth Medium (Human) 肠癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Gastric Cancer Organoid Growth Medium (Human) 胃癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Liver Cancer Organoid Growth Medium (Human) 肝癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Breast Cancer Organoid Growth Medium (Human) 乳腺癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Lung Cancer Organoid Growth Medium (Human) 肺癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Esophageal Cancer Organoid Growth Medium (Human) 食管癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Ovarian cancer Organoid Growth Medium (Human) 卵巢癌类器官生长培养基 |
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Cebrary® Intestinal Organoid Growth Medium (Mouse) 小鼠肠类器官生长培养基 |
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聚焦类器官(3)-多物种类器官培养基,解锁高效类器官研究全方案!
4)细菌培养基
细菌培养基是人工配制的、供细菌生长繁殖的营养基质,其成分和用途各异,常见类型根据培养目的可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基等,根据是否物理状态(是否添加如琼脂凝固剂)可分为液态、半固态和固态培养基,主要用于观察细菌形态、运动性或分离纯化。
LB培养基(LB Medium)是微生物学领域中应用极为广泛的一种细菌培养基,尤其适合于大肠杆菌等微生物的培养。该培养基的主要成分包括胰蛋白胨(Tryptone)、酵母提取物(Yeast Extract)和氯化钠(NaCl)。其中,胰蛋白胨和酵母提取物为微生物提供了必需的碳源、氮源、维生素和生长因子,而氯化钠则有助于维持培养环境的渗透压平衡。LB培养基分为液体和固体两种形式,固体培养基是在液体培养基中添加了琼脂(Agar)作为凝固剂。
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产品货号 |
产品名称 |
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LB Agar Medium LB琼脂培养基(无抗生素,加热即用型) |
2.细胞培养缓冲液
细胞学实验中必不可少的试剂就是缓冲液,它可以保护细胞免受pH波动的影响,平衡细胞膜的渗透压。平衡盐溶液通常包括钠(Na)、磷酸钠(Na3PO4)、钾(K)、钙(Ca)、镁(Mg)和氯化物(Cl)。K+和Na+调节渗透性和张力,而Mg2+和Ca2+保持细胞膜和内部结构的完整性。通过磷酸盐和碳酸氢盐,平衡盐溶液还能控制氢离子浓度,有些还包括葡萄糖等碳水化合物,可以为细胞提供能量。
PBS是磷酸缓冲盐溶液的简称,其能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力,是生物学中经常使用的缓冲盐溶液。蒸馏水不具有盐平衡作用,会破坏生物蛋白的结构及生物特性,生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以一般有活性的生物制剂稀释,PBS是首选。PBS常应用于免疫组化、原位杂交、酶联免疫以及细胞培养等实验中,例如洗涤组织,清洗免疫印迹膜和稀释细胞等。
D-PBS为常用的磷酸盐缓冲溶液,又称Dulbecco磷酸缓冲盐溶液、D-PBSA、CMF-DPBS溶液或DPBS溶液,与PBS缓冲溶液相比,D-PBS组成成分中可含或不含钙、镁离子以及含或不含葡萄糖和丙酮酸,具体根据实验需要选购,例如:细胞解离前,需选购不含钙、镁离子D-PBS从培养物中冲洗掉螯合剂。D-PBS常用于细胞洗涤、保存和培养,也用于微生物培养。
碳酸氢钠(NaHCO3)是细胞培养中常用的缓冲液,其与CO2共同构成了培养基中的CO2/HCO3-缓冲系统,通过调节CO2浓度来维持pH值的稳定。培养基中碳酸氢钠的最终浓度取决于培养基的配方和培养箱的二氧化碳浓度。培养基中的NaHCO3含量决定了细胞培养时应使用的CO2浓度。当NaHCO3含量为每公升3.7g时,应使用10%CO2;当NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5%CO2。此外,碳酸氢钠提供一些营养价值,且很少对细胞有毒。
Tris(三羟甲基氨基甲烷)为弱碱,也称Tris base或2-Amino-2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol,分子式为C4H11NO3,相对分子量为121.14,可提供稳定的pH环境,防止核酸因酸碱变化而发生水解。Tris碱的水溶液pH在10.5左右,一般加入浓盐酸调节pH值至所需值,即可获得该pH值下的缓冲液。Tris-HCl常应用于生物大分子稳定保存,电泳以及分析实验等。例如,可用于配制SDS-PAGE或native PAGE的上层胶、分子实验试剂配制,也可以用于要求无菌的细胞培养等相关溶液的配制。
TE Buffer即Tris-EDTA缓冲液,Tris(三羟甲基氨基甲烷)为弱碱,也称Tris base或2-Amino -2-(hydroxymethyl)-1,3-propanediol,分子式为C4H11NO3,相对分子量为121.14,可提供稳定的pH环境,防止核酸因酸碱变化而发生水解。EDTA是一种强效的金属离子螯合剂,能有效抑制依赖于Mg2+的核酸酶活性,从而防止DNA或RNA被降解。Tris碱溶于水后,一般加入浓盐酸调节pH8.0,再加入EDTA并充分溶解,最后以纯水定容。1×TE缓冲液含有10 mM Tris和1 mM EDTA,配好的TE缓冲液需高温高压灭菌,灭活DNase,保证核酸储存安全。TE Buffer常应用于储存和稀释DNA/RNA,防止核酸降解,也可作为PCR、电泳等实验的缓冲液,还可以用于细胞培养中的缓冲和保护。
HBSS,即Hank's 平衡盐溶液,主要成分有葡萄糖、碳酸氢钠、氯化钠、氯化钾和磷酸盐,pH值为7.2-7.4,是等渗溶液,用于短期维持生长培养基以外的细胞,而且可以在没有CO2的情况下使用。HBSS组成成分中可含或不含钙、镁离子以及酚红,具体根据实验需要选购,例如:不含钙镁离子的配方可用于细胞解离前清洗螯合剂。HBSS常用于多种细胞培养用途,如在解离细胞前的冲洗,运输细胞或组织样品,稀释细胞用于细胞计数,以及用来配制各种试剂溶液。
EBSS,即Earle's平衡盐溶液(Earle's Balanced Salt Solution),主要成分有葡萄糖、碳酸氢钠、氯化钠、氯化钾和磷酸盐,pH值为7.2-7.4,是等渗溶液,用于短期维持生长培养基以外的细胞,但需要在5% CO2下使用。HBSS组成成分中可含或不含钙、镁离子以及酚红,具体根据实验需要选购,例如:不含钙镁离子的配方可用于细胞解离前清洗螯合剂。EBSS在细胞培养实验中广泛应用,主要用于细胞的漂洗。
HEPES,中文名为N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-(2-乙磺酸),是可满足于所有生物学研究的最佳缓冲液之一。绝大部分生理pHs下HEPES是一种两性离子有机化学缓冲剂,属于Good’s缓冲试剂之一,pH 6.0-8.5范围内的缓冲能力最强。HEPES应用非常广泛,包括:1)用作细胞培养的缓冲体系,常用工作浓度为10-25 mM(建议用细胞培养基稀释),与无机碳酸氢盐缓冲系统相比,在组织或者器官培养中表现出更好的pH控制能力。不像碳酸氢盐,HEPES不为细胞供给营养,只有当需要长时间在CO2培养箱内处理细胞,才会加入培养基内以增强缓冲能力。2)用作两性电解质溶液,HEPES能溶解两性电解质,制备<1 pH单位宽度的pH梯度以用于等电聚焦电泳实验(超纯水稀释);3)用作电镜观察蛋白沉积技术合适的缓冲体系,因HEPES不会对金属基板造成负面影响;4)可用作定量和选择性测定抗原-抗体反应的缓冲试剂。
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产品货号 |
产品名称 |
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1× PBS 细胞培养级 |
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10× PBS,细胞培养级 |
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1× PBS Buffer,PBS 缓冲液(粉末),PH 7.4,1L |
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D-PBS,不含钙、镁离子,1× |
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1× DPBS Buffer,DPBS 缓冲液 (粉末,不含钙镁),PH 7.4,1L |
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Tris-HCl 三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐 (超纯) |
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1 M Tris-HCl Buffer (pH=8.5,Sterile,DNase free) 1 M Tris-HCl缓冲液(pH=8.5, Sterile,DNase free) |
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1M Tris-HCl (pH6.8) |
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TE Buffer,1× TE缓冲液 |
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1× Hank's 平衡盐溶液(HBSS)含钙、镁离子,不含酚红 |
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1× Hank's 平衡盐溶液(HBSS)不含钙、镁离子和酚红 |
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1× Earle's 平衡盐溶液(EBSS)不含钙、镁离子和酚红 |
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1× Earle's 平衡盐溶液(EBSS)含钙、镁离子和酚红 |
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HEPES Free Acid (1 M) Buffer Solution, Cell Culture Grade HEPES溶液(1 M),细胞培养级 |
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Sodium bicarbonate, for cell culture 碳酸氢钠, 用于细胞培养 |
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3.其它细胞培养添加剂
在细胞培养过程中,培养基的组成对于细胞的生长、增殖和分化具有至关重要的影响。不同类型的细胞对培养基的成分需求差异大,而培养基中的添加剂则起到了调节和优化的作用。细胞培养添加剂不仅可以解决基础培养基难以满足部分细胞(如肿瘤细胞、快速增殖细胞)营养需求的难题,而且可定制细胞生长条件、提高细胞活力和生长率,更长久地维持细胞健康。简单说,基础培养基解决“温饱问题”,添加剂解决“优化问题”,两者配合才能让细胞培养更高效。
1)抗生素
抗生素是指由微生物(包括细菌、真菌、放线菌属)或高等动植物在生活过程中所产生的具有抗病原体或其他活性的一类次级代谢产物,能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。抗生素等抗菌剂的抑菌或杀菌作用,主要是针对“细菌有而人(或其他动植物)没有”的机制进行杀伤,作用机理包含:抑制蛋白合成、抑制细胞壁合成、破坏细胞核功能、抑制核酸合成和影响微生物代谢功能。在体外细胞培养中为预防微生物污染,常在培养液中加入抗生素。
原代细胞细胞模型很容易受到来自宿主动物或细胞分离过程中的自然菌群污染。原代细胞抗生素由多种抗生素组成,是一种广谱抗生素制剂,可保护原代细胞免受革兰氏阳性菌(例如芽孢杆菌和葡萄球菌属)和革兰氏阴性菌(例如大肠杆菌,肠杆菌、铜绿假单胞菌和不动杆菌)、支原体和真菌(例如酵母菌)等微生物污染,同时,其具有最小细胞毒性,可最大程度保护原代细胞的活性和正常生长。常适用于原代细胞培养、类器官培养、干细胞培养等。
青霉素最初从真菌青霉菌中提纯制成,并通过直接干扰细菌细胞壁的合成、间接通过触发可进一步改变细胞壁的酶释放来发挥作用。链霉素最初从灰色链霉菌中提纯制成,与细菌核糖体的30S亚单位结合,进而抑制蛋白合成,导致敏感细菌死亡。常适用于抑制多数革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的生长。
青霉素最初从真菌青霉菌中提纯制成,并通过直接干扰细菌细胞壁的合成、间接通过触发可进一步改变细胞壁的酶释放来发挥作用。链霉素最初从灰色链霉菌中提纯制成,新霉素从弗氏链霉菌中提纯制成。链霉素和新霉素的作用机制为与细菌核糖体的30S亚单位结合,进而抑制蛋白合成,导致敏感细菌死亡。常适用于对革兰阳性细菌和革兰阴性细菌的联合抗菌。
青霉素最初从真菌青霉菌中提纯制成,并通过直接干扰细菌细胞壁的合成、间接通过触发可进一步改变细胞壁的酶释放来发挥作用。链霉素最初从灰色链霉菌中提纯制成,两性霉素B由结节链霉菌产生,通过提高真菌细胞膜通透性防止真菌生长。它用于防止细胞培养受到酵母菌和霉菌污染。常适用于对细菌和真菌的联合抗菌。
硫酸庆大霉素(Gentamicinsulfatesalt)是一种广谱氨基糖苷类抗生素,对大量革兰阴性细菌及革兰阳性菌都有良好抗菌能力,甚至包括某些β-内酰胺敏感的抗万古霉素(VRE)肠球菌,和耐糖肽抗生素的一些“超级细菌”。其抑菌机理在于通过与细菌核糖体30S亚基结合导致密码子错误,阻断肽酰-tRNA从A位点到P位点的转运,从而抑制细菌蛋白质的合成。常适用于a.微生物学研究,常用于药敏实验筛选敏感性细菌;b.细胞培养内抑制细菌污染,有效浓度为0.5-50 µg/mL;c.分子生物学研究,常用来选择性筛选携带庆大霉素抗性基因的阳性克隆,常用使用浓度15 µg/mL。
其他抑菌剂和抗生素选购请参考抑菌剂-选购指南、稳定高品质抗生素、抗生素选择指南全攻略和类器官&原代细胞专属抗生素相关专题。
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Antimicrobial agent for primary cells原代细胞抗生素 |
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青霉素-链霉素-新霉素 (PSN),100X |
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Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B 青霉素-链霉素-两性霉素B,100X |
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Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell culture 细胞培养用青霉素-链霉素(双抗) |
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Gentamicin Solution,Sterile硫酸庆大霉素无菌溶液(10 mg/mL) |
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Gentamycin Sulfate Salt 硫酸庆大霉素 |
2)氨基酸添加剂
氨基酸(Amino Acids)是蛋白质组成的基本单位,也是构成生命的重要成分。它们通过肽键连接形成多肽链,进而折叠成具有特定三维结构的蛋白质,参与催化生化反应的酶、传递信号的受体、运输物质的载体以及构成细胞骨架等几乎所有生命活动。根据细胞自身合成的能力,可将氨基酸分为三类:必需氨基酸、半必需氨基酸和非必需氨基酸。
L-谷氨酰胺(L-Glutamine)是一种重要的氨基酸添加剂,它可作为细胞辅助能源,同时也参与嘌呤和嘧啶核苷酸、氨基糖类、谷胱甘肽、L-谷氨酸和其他氨基酸的形成,并参与蛋白质的合成和葡萄糖的产生。对于维持细胞培养基的完整性和提供细胞所需的能量至关重要,缺乏L-谷氨酰胺会导致细胞生长受阻甚至细胞死亡。L-谷氨酰胺在溶液中很不稳定,尤其在有磷酸或者碳酸基团存在的条件下,所以加有L-谷氨酰胺的培养液不易长期存放,放置时间过长应考虑补充L-谷氨酰胺,使用浓度取决于用于细胞类型和培养基,但一般浓度为2~6 mM。适用于多种细胞类型,包括哺乳动物细胞和昆虫细胞。
L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-Alanyl-L-Glutamine)溶液是L-谷氨酰胺溶液的稳定替代产品。在液体培养基中,L-Glutamine容易分解并产生氨,这可能对细胞产生毒性或干扰蛋白质的糖基化过程,而L-Alanyl-L-Glutamine作为L-Glutamine的二肽形式(工作原理等同于GlutaMAX添加剂),在高浓度溶液或者细胞培养基中,都显示出极高的稳定性,不会像L-Glutamine那样在储存或细胞培养过程中分解产生氨,细胞在需要时会通过酶的作用剪断二肽的肽键,释放出Glutamine。这种特性使得L-Alanyl-L-Glutamine既可保持长时间稳定的营养供给,也降低了分解产物造成的细胞毒性,增强了细胞的活性并促进了细胞的生长。常适用于哺乳动物细胞培养,包括哺乳动物贴壁细胞或悬浮细胞培养。
MEM非必须氨基酸溶液(NEAA),源自MEM培养基配方,主要成分为L-丙氨酸、L-天门冬酰胺、L-天门冬氨酸、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸和L-丝氨酸等7种氨基酸。常用于细胞培养基的添加剂,能有效改善细胞培养基配比,降低细胞培养时细胞自身生产非必需氨基酸的副作用,补充细胞培养基中缺乏的非必需氨基酸,促进细胞生长和代谢。
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L-Glutamine Solution(200 mM) L-谷氨酰胺溶液(200 mM) |
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L-Glutamine L-谷氨酰胺 |
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L-Alanyl-L-Glutamine L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(等同于GlutaMAX添加剂) |
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MEM 非必需氨基酸溶液(NEAA),100X |
3)生长因子和细胞因子
选购请参考翌圣生物HiActi细胞因子系列产品-选购指南相关专题
4)血清白蛋白
选购请参考牛血清白蛋白(BSA牛血清蛋白)和重组人血清白蛋白相关专题
5)其它培养基添加剂
Sodium Pyruvate,即丙酮酸钠,也称α-ketopropionic acid sodium salt、2-oxopropanoic acid sodium salt、pyruvic acid sodium salt,分子式为C3H3NaO3,CAS号为113-24-6,相对分子量为110.0。丙酮酸钠是细胞在糖酵解途径中的中间代谢物,因此它并非所有细胞培养的必需添加剂。作为一种额外的碳源补充到培养基中,丙酮酸钠不仅可为细胞提供能量,还能避免当葡萄糖作为唯一碳源时代谢产物乳酸的堆积。此外,它还具有抗氧化作用,能保护细胞免受过氧化氢等氧化应激的损伤。若细胞已在含丙酮酸钠的培养基中生长,建议继续使用该添加剂,因为一旦该添加剂,细胞的生长可能会变缓慢。丙酮酸钠常添加于低葡萄糖配方培养,有时高糖细胞培养基中也需要添加丙酮酸钠。
HAT添加剂是次黄嘌呤、氨基蝶呤和胸苷的液体混合物。单克隆抗体生产的关键步骤是获得杂交瘤细胞(hybridoma或者cellhybrids),杂交瘤细胞是骨髓瘤细胞和小鼠脾细胞融合得到的,融合后杂交瘤细胞的筛选在添加有HAT的培养基中进行。HAT添加剂中的叶酸拮抗剂氨基蝶呤(Aminopterin)通过抑制二氢叶酸还原酶3(Dihydrofolate reductase3)的活性进而阻断DNA的合成,不能利用补救途径(salvage pathway)合成核苷酸的细胞其生长被限制。在添加次黄嘌呤(hypoxanthine)和胸苷(thymidine)的培养基中,有能力合成次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRTase)和胸苷激酶(TK)的细胞能够利用补救途径合成核苷酸。HPRTase阳性的原代脾细胞由于不能在体外培养环境中长期生存随着细胞的传代逐渐被淘汰。只有同时具备骨髓瘤细胞的“永生化”和脾细胞HPRTase/TK阳性双重特征的杂交瘤细胞才能在添加有HAT的培养基中生长,从而实现对HGPRT-骨髓瘤杂交瘤细胞的特异性筛选。因此HAT Supplement 常用作用做抗体生产中HGPRT-骨髓瘤杂交瘤细胞融合后的筛选剂。
HT添加剂是次黄嘌呤钠和胸苷的液体混合物。添加有HAT的细胞培养基能够有选择性地抑制未融合的骨髓瘤细胞或者同种细胞融合形成的杂交细胞生长,HPRTase阳性的原代脾细胞由于不能在体外培养环境中长期生存随着细胞的传代逐渐被淘汰。只有同时具备骨髓瘤细胞的“永生化”和脾细胞HPRTase/TK阳性双重特征的杂交瘤细胞才能在添加有HAT的培养基中生长。筛选过程通常延续10-14周,随后细胞转移到添加有hypoxanthine和thymidine但不含aminopterin添加剂(HT)的培养基中继续培养2-3周,然后转入正常杂交瘤细胞生长所需的培养基中。因此,HT常作为DNA补救合成途径的添加剂用于杂交瘤从细胞筛选后恢复,以克服细胞内残留氨基喋呤对DNA经典合成途径的抑制作用,当核苷的生物合成途径恢复后,即可停止使用HT添加剂。
胰岛素、转铁蛋白和硒溶液,即Insulin-Transferrin-Selenium(ITS)是牛胰岛素、人转铁蛋白和亚硒酸钠的混合物。它是一种通用细胞补充剂,用于减少培养细胞所需的胎牛血清(FBS)的使用量,通常可使FBS的使用量从10%降到2-4%。胰岛素可促进细胞对葡萄糖和氨基酸的吸收,有助于细胞内蛋白和核酸的合成;转铁蛋白不仅可以提供微量的铁元素,还有助于降低氧自由基和过氧化物的毒性;亚硒酸钠是一些重要酶的辅助因子,可起到抗氧化剂的作用。ITS常适用于含有丙酮酸钠的非复杂培养基(例如MEM、RPMI-1640)和复杂培养基(例如Ham’s F-12、DMEM/F-12)中来减少FBS使用量。
NSC-27是一种最常被引用的神经细胞培养添加剂,是一种优化的无血清添加剂,用于支持胚胎、出生后和成年海马神经元和其他中枢神经系统(CNS)神经元的生长和活性维持。在神经元基础培养基中使用NSC-27添加剂,用于培养产前和胚胎神经元,以获得优化的活性和长期的存活率。NSC-27与B-27效果一致,故可以代替B-27添加剂。NSC-27无血清添加剂,可以与基础培养基(Neuronal)培养基组合使用,用于神经细胞培养而无需再添加饲养层细胞;去除维生素A的无血清NSC-27添加剂,可防止神经干细胞向神经细胞分化。去除抗氧化剂的无血清NSC-27添加剂;以利于在氧化应激及损伤、氧自由基对神经损伤和凋亡的研究中排除抗氧化剂的干扰。
更多NSC-27使用和选购指南请参考翌圣官网产品应用专题:
NSC-27 supplement,NSC-27无血清添加剂介绍手册
革新之作!高效多功能,新一代无血清添加剂(NSC-27/N-2)来了!
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产品货号 |
产品名称 |
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Sodium Pyruvate (100 mM) 丙酮酸钠 (100 mM) |
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Sodium Pyruvate 丙酮酸钠 |
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Insulin-Transferrin-Selenium (100X) ITS 胰岛素、转铁蛋白和硒溶液,100X |
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HAT Supplement (50X) HAT添加剂,50X |
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HT Supplement (50X) HT添加剂,50X |
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50X无血清NSC-27添加剂,等同于B-27 |
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50X无血清NSC-27添加剂,去除维生素A,等同于B-27 |
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50X无血清NSC-27添加剂,无抗氧化剂,等同于B-27 |
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无血清NSC-27添加剂(非动物源),等同于B-27 |
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无血清NSC-27添加剂,去除维生素A(非动物源),等同于B-27 |
