动物组织消化胶原酶的选购指南

动物组织消化胶原酶选购指南

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2019-12-10

——动物组织消化利器

图1：胶原酶

产品介绍

胶原酶（Collagenase）是一类肽链内切酶，能够特异性地识别Pro-X-Gly-Pro序列（该序列高频率出现在胶原中，很少发现于其他蛋白中），并切割该序列中的中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键，能够高效水解结缔组织中的胶原蛋白。

许多蛋白酶都能水解单链和变性的胶原多肽，但胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，其广泛存在于结缔组织内，其中有效的胶原酶是由厌氧细菌溶组织梭菌（Clostridium histolyticum）分泌的“粗”胶原酶。

翌圣胶原酶来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种酶“粗”提物，不仅含有能够降解天然胶原和网状纤维的胶原酶，还含有其他的一些蛋白酶如多糖酶、脂酶等，能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质等，因此更适用于组织消化。

目前市面上的细菌胶原酶依据胶原酶的活性差异主要分为5种类型：胶原酶I型，II型，III型，IV型和V型等。

胶原酶的选择

产品名称	外观	酶活	应用范围
胶原酶I（Type I Collagenase）	棕色或棕褐色结晶性粉末	≥125 U/mg solid	包含（胶原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶）活性，用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
胶原酶II（Type II Collagenase）	棕色或棕褐色结晶性粉末	≥125 U/mg solid	含更多的梭菌蛋白酶活性，适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织细胞的分离
胶原酶III（Type III Collagenase）	棕色或棕褐色结晶性粉末	≥100 U/mg solid	含低蛋白水解活性，对消化组织中连接部分较为有效，常用于哺乳动物组织细胞解离
胶原酶IV（Type IV Collagenase）	棕色或棕褐色结晶性粉末	≥125 CDU/mg solid*	含低胰酶活性，常用于胰岛和受体完整性的细胞制备
胶原酶V（Type V Collagenase）	棕色或棕褐色结晶性粉末	≥125 CDU/mg solid*	含至少7种蛋白酶成分，可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞

*CDU = collagen digestion units

产品特性

1. 消化效率高：溶组织梭菌的酶粗提物，对组织消化效率高。

2. 依赖于活化剂：胶原酶需要借助二价阳离子如Ca²⁺、 Zn²⁺等活化酶的活性。

3. 受抑制剂影响：胶原酶的抑制剂有EDTA 、EGTA等；二是重金属离子（Hg²⁺,Pb²⁺,Cd²⁺）；还有一些化学试剂，如Cysteine、histidine、DTT、2-mercaptoethanol、o-phenanthroline等对胶原酶也有抑制作用。

4. 耐干扰性强：细胞培养所用的血清不会影响胶原的作用。

更具竞争力的价格

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图2：价格对比图

FAQ

一、使用方法：在Hank's（60147ES），Earle's (60151ES)或者其他平衡盐溶液中溶解，推荐使用工作浓度0.05 % ~0.5 % (w/v)

二、存储温度： 2~8℃

三、使用建议：

①对于胶原蛋白结构和生物合成研究，常使用更高纯度的胶原酶制剂，不含其他蛋白水解活性。

②对于组织解离，常使用粗制胶原酶制剂，例如弹性蛋白酶(40516ES)，胰蛋白酶(40101ES)或木瓜蛋白酶（60373ES）等。

四、常见问题：

1、实验过程中消化作用不佳

①如果是酶活不强或钙离子不足导致，应在低温干燥条件下储存胶原酶，胶原酶溶液分装后冻存

②如果是钙离子不足导致，应将胶原酶溶液中钙离子浓度设置为5 mM。

2、使用过程中出现细胞死亡

①如果是蛋白酶过量，应减少蛋白酶接触时间或是加入白蛋白或灭活血清

②如果是pH 改变应使用缓冲液（如HBSS）；经常检查并重新调节pH

③如果氧气太少，应给消化液通无菌空气

3、实验中出现细胞受损

如果是蛋白酶过多导致，应减少蛋白酶用量或是加入白蛋白或灭活血清

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40516ES	Elastase, Lyophilized 弹性蛋白酶（冻干）（≥3 U/mg protein）	能水解天然弹性蛋白,广泛适用于组织和细胞解离操作，尤其适合II型肺细胞分离
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