生物制品生产中经常会涉及到细胞培养或组织培养,在这些培养中胎牛血清被广泛应用,为细胞生长提供必须的营养成分,而胎牛血清中就包含了一定量的BSA(Bovine serum albumin,牛血清白蛋白)。
考虑到生产的药物的安全性,目前疫苗、抗体药物、组织工程产品以及细胞&GCT等生物制品的生产过程中,逐渐使用无血清培养基来替代含血清培养基,从而减少可能由血清带来的病毒污染等潜在危害。其中,无血清培养基多采用各种可以替代血清功能的生物大分子配制而成,例如牛血清白蛋白(BSA)、转铁蛋白和胰岛素。
由此,无论使用含血清培养基还是无血清培养基,都会有BSA。虽然在生产中经过纯化等步骤去除了大部分的杂质蛋白,但仍然会有微量的外源蛋白(如BSA等)存在于最终的生物制品中。BSA作为外源蛋白进入人体后可能引起严重过敏反应,从而影响生物制品的安全性。所以BSA检测项目是生物制品生产工艺中重要的质量检测指标之一。
使用含BSA的血清或者无血清培养基进行生物制品生产时,必须对中间品和终产品等高度纯化。尽管如此,这些产品的制造和纯化过程还是会不可避免的留下BSA杂质。这些杂质可导致不良的毒性或免疫反应,因此最好将牛血清白蛋白的杂质降低到实际使用的最低水平。各国法规都有涉及BSA的论述,要求必须对生物药品进行分析和纯化,以将BSA降低到可接受的水平。
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2020版《中国药典》(三部)对各种疫苗中BSA残留量进行明确规定,基本是不高于50ng/mL或不高于50ng/剂。
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《美国药典》要求生物制品中BSA残留的限制为50 ng/dose或500 ppm。
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《欧洲药典》要求生物制品中的BSA残留的限制为0.1至1.0 μg/dose。
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2022年CDE发布的《免疫细胞治疗产品药学研究与评价技术指导原则(试行)》:在进行常规外源因子检测的基础上,根据可能引入的外源因子,可结合体内和体外方法开展特定外源因子的检测。例如,生产中若使用牛血清,需进行牛源特定病毒的检测。
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2023年CDE发布的《基因治疗制品质量控制研究考虑要点》中,也明确要求对制剂制备过程中残余的牛血清白蛋白进行检测。
目前常见的BSA残留的检测方法有:免疫扩散法、免疫电泳法、表面等离子共振法以及酶联免疫吸附测定法(ELISA法)这四种。其中,ELISA法由于操作简便、快速、高灵敏、高通量、低成本等特点,已成为行业内普遍使用的方法。并且2020年版《中国药典》三部通则3411中提到的采用酶联免疫吸附法测定供试品中残余牛血清白蛋白(BSA)含量。
翌圣生物依托相关法规,从市场需求出发,自主研发了牛血清白蛋白(BSA)残留量检测试剂盒。试剂盒采用双抗夹心酶联免疫检测(ELISA)的实验原理,以及辣根过氧化物酶(HRP)信号放大系统,能够高灵敏的检测样本中牛血清白蛋白残留量。试剂盒可以用于生物制品纯化工艺过程的优化、中间工艺过程的杂质控制以及终产品的放行检测。
项目 |
参数性能 |
实验原理 |
双抗夹心ELISA法 |
信号放大 |
抗体+抗原+抗体-HRP复合物(两步法) |
检测波长 |
450nm和630nm |
实验时长 |
<3 h |
检测范围 |
1.5625~50ng/mL |
标准品溯源 |
溯源至国家标准品 |
准确性 |
样本加标回收率80%~120% |
精密度 |
批内重复性CV<10%,批间差CV<15% |
灵敏度 |
定量下限(LLOQ)分别为1.5ng/mL,检测下限(LLOD)分别为0.5ng/mL |
适用机型 |
Molecular Devices:M和i系列 |
应用 |
检测疫苗、抗体药物、组织工程产品以及细胞基因治疗药物等生产过程中的BSA残留量 |
产品 |
货号 |
品名 |
规格 |
牛血清白蛋白(BSA)检测试剂盒 |
36722ES |
BSA ELISA Kit 牛血清白蛋白ELISA检测试剂盒 |
96T |
品类 |
货号 |
品名 |
规格 |
宿主残留蛋白(HCP) 检测试剂盒 |
E.coli HCP ELISA Kit 大肠杆菌宿主蛋白ELISA试剂盒 |
48T/96T |
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HEK293 HCP ELISA kit HEK293 HCP ELISA检测试剂盒 |
48T/96T |
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CHO HCP ELISA kit (CHO-K1) CHO HCP ELISA检测试剂盒(CHO-K1) |
48T/96T |
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E.coli HCP ELISA Kit (Plasmid) E.coli HCP ELISA检测试剂盒(质粒) |
48T/96T |
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工艺酶或蛋白检测试剂盒 |
UCF.ME® UltraNuclease ELISA Kit 全能核酸酶检测试剂盒 |
96T |
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Salt Active UltraNuclease ELISA kit 耐高盐全能核酸酶ELISA试剂盒 |
48T/96T |
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Protein A ELISA Kit Protein A ELISA检测试剂盒 |
48T/96T |