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肿瘤坏死因子α（TNF-α），也称为恶病质素，又名TNFSF1A，是一种多效细胞因子，在炎症、细胞凋亡和免疫系统发育中起核心作用，可由多种免疫细胞、上皮细胞、内皮细胞和肿瘤细胞产生。TNF-α受体主要是TNFR1和TNFR2，其信号可以激活caspase 8、转录因子NF-κB和激酶JNK等。人TNF-α的氨基酸组成与小鼠TNF-α有79%的同源性，TNF-α的生物学功能似乎没有明显的种属特异性。研究表明TNF-α一方面对某些类型的感染具有抵抗力，另一方面又引起炎症，在病理过程中起着矛盾的作用。TNF-α也可能影响葡萄糖摄取与胰岛素抵抗密切相关。同时TNF-α在肿瘤增殖、迁移、侵袭和血管生成中也起着关键作用。
翌圣Human TNF-α ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的人肿瘤坏死因子α(Human TNF-α)。特异性抗人肿瘤坏死因子α抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的人肿瘤坏死因子α与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中人肿瘤坏死因子α的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
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货号 |
97072ES48 / 97072ES96 |
|
规格 |
48 T / 96 T |
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检测范围 |
15.63-1000 pg/mL |
|
检测方法 |
双抗夹心法 |
|
检测物种 |
人 |
|
检测时长 |
4.5小时 |
|
灵敏度 |
5.06 pg/mL |
|
稀释线性 |
82 - 118% |
|
回收率 |
78 - 112% |
|
板内差 |
3.5% |
|
板间差 |
5.3% |
实验数据
- 标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
|
浓度（pg/mL） |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
|
|
1000 |
2.396 |
2.308 |
2.352 |
2.353 |
|
500 |
1.419 |
1.469 |
1.444 |
1.437 |
|
250 |
0.780 |
0.825 |
0.803 |
0.814 |
|
125 |
0.426 |
0.466 |
0.446 |
0.443 |
|
62.5 |
0.237 |
0.252 |
0.245 |
0.241 |
|
31.25 |
0.134 |
0.139 |
0.136 |
0.134 |
|
15.625 |
0.078 |
0.084 |
0.081 |
0.080 |
|
0 |
0.022 |
0.021 |
0.021 |
/ |
- 灵敏度检测
TNF-α的最低检测限为5.06 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定10次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
|
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
6 |
6 |
6 |
23 |
23 |
23 |
|
|
平均值 |
464.24 |
134.10 |
33.06 |
482.84 |
130.37 |
33.90 |
|
标准差 |
12.57 |
7.12 |
0.79 |
26.08 |
7.86 |
1.56 |
|
变异系数（%） |
2.7 |
5.3 |
2.4 |
5.4 |
6.0 |
4.6 |
- 回收率检测
通过不同水平的TNF-α添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
血清 |
102.9 |
90.5-112.5 |
|
血浆 |
90.4 |
78.5-100.4 |
|
血浆细胞培养上清 |
95.3 |
88.9-100.2 |
- 稀释线性检测
|
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
98.5 |
94.2-101.8 |
|
1:04 |
95.1 |
93.3-96.4 |
|
1:08 |
99.1 |
93.8-102.5 |
|
1:16 |
101.3 |
91.2-106.5 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
96.7 |
85.7-103.6 |
|
1:04 |
94.8 |
84.7-106.8 |
|
1:08 |
99.7 |
86.1-116.9 |
|
1:16 |
95.9 |
81.7-118.0 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
95.1 |
92.7-96.3 |
|
1:04 |
97.7 |
96.2-99.0 |
|
1:08 |
102.5 |
101.7-103.8 |
|
1:16 |
101.6 |
97.8-104.5 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
|
血清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
|
血浆 |
6 |
n.d. |
n.d. |
|
细胞培养上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得15.63 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组人肿瘤坏死因子α。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
||
|
IL-1α |
IL-10 |
IL-1α |
IL-10 |
|
IL-1β |
IL-12 |
IL-1β |
IFN-γ |
|
IL-2 |
IFN-γ |
IL-2 |
TNF-α |
|
IL-4 |
LIF |
IL-4 |
VEGF |
|
IL-5 |
RANKL |
IL-5 |
RANKL |
|
IL-6 |
TRAIL |
IL-6 |
TRAIL |
|
IL-8 |
|
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检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
|
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
|
稀释方法不恰当 |
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
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移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
Ver. CN20231208
