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Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®是Illumina®高通量测序平台RNA文库构建专用接头引物试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer，配合 Yeasen出品的RNA建库试剂盒使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。
产品组分
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编号 |
名称 |
规格 |
|
12414ES02 |
PE Adapter |
320 μL |
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RP 501-508 |
60 μL each |
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RP 701-712 |
40 μL each |
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12415ES02 |
PE Adapter |
320 μL |
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RP 509-516 |
60 μL each |
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RP 713-724 |
40 μL each |
运输与保存方法
冰袋运输。
所有组分-20°C保存，有效期18个月。
注意事项
1）本试剂盒中PE Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒的推荐用量进行调整。 Index Primer的浓度为10 μM。
2）本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。
3）本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer (RP 5xx)和12种i7 Index Primer (RP 7xx)，互相组合可以构建96种不同组合的双端Index标记文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12414中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）与Cat#12415中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。
4）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。
5）使用Hieff NGS® RNA 384 CDI Primer for Illumina®试剂盒构建的测序文库结构如下：
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7）本产品仅作科研用途！
使用方法
1. 接头的使用：参照所用建库说明书中对不同投入量的推荐用量稀释至合适浓度使用。
2. Index Primer的使用：按照建库说明书中文库扩增体系配制反应体系（如下表），反应程序按照建库说明书中程序进行设置。
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组分名称 |
体积（μL） |
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2× High Fidelity DNA PCR Mix |
25 |
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RP 5xx |
2.5 |
|
RP 7xx |
2.5 |
|
Adapter Ligated DNA |
20 |
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Total |
50 |
序列信息
PE Adapter for Illumina：
5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´
5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´
i5 Index Primer for Illumina：
5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´
i7 Index Primer for Illumina：
5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´
[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列，[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列，各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示：
|
I5 Index Primers |
引物中的序列 |
Sample Sheet输入/测序时Index序列 |
|
|
NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500 |
NovaSeq 6000 v1.5 reagents， MiniSeq, NextSeq, |
||
|
RP501 |
TATAGCCT |
TATAGCCT |
AGGCTATA |
|
RP502 |
ATAGAGGC |
ATAGAGGC |
GCCTCTAT |
|
RP503 |
CCTATCCT |
CCTATCCT |
AGGATAGG |
|
RP504 |
GGCTCTGA |
GGCTCTGA |
TCAGAGCC |
|
RP505 |
AGGCGAAG |
AGGCGAAG |
CTTCGCCT |
|
RP506 |
TAATCTTA |
TAATCTTA |
TAAGATTA |
|
RP507 |
CAGGACGT |
CAGGACGT |
ACGTCCTG |
|
RP508 |
GTACTGAC |
GTACTGAC |
GTCAGTAC |
|
RP509 |
GACCTGTA |
GACCTGTA |
TACAGGTC |
|
RP510 |
ATGTAACT |
ATGTAACT |
AGTTACAT |
|
RP511 |
GTTTCAGA |
GTTTCAGA |
TCTGAAAC |
|
RP512 |
CACAGGAT |
CACAGGAT |
ATCCTGTG |
|
RP513 |
TAGCTGCC |
TAGCTGCC |
GGCAGCTA |
|
RP514 |
AGCGAATG |
AGCGAATG |
CATTCGCT |
|
RP515 |
TATGCTGC |
TATGCTGC |
GCAGCATA |
|
RP516 |
AGAAGACT |
AGAAGACT |
AGTCTTCT |
|
I7 Index Primers |
引物中的序列 |
Sample Sheet输入/测序时Index序列 |
|
RP701 |
CGAGTAAT |
ATTACTCG |
|
RP702 |
TCTCCGGA |
TCCGGAGA |
|
RP703 |
AATGAGCG |
CGCTCATT |
|
RP704 |
GGAATCTC |
GAGATTCC |
|
RP705 |
TTCTGAAT |
ATTCAGAA |
|
RP706 |
ACGAATTC |
GAATTCGT |
|
RP707 |
AGCTTCAG |
CTGAAGCT |
|
RP708 |
GCGCATTA |
TAATGCGC |
|
RP709 |
CATAGCCG |
CGGCTATG |
|
RP710 |
TTCGCGGA |
TCCGCGAA |
|
RP711 |
GCGCGAGA |
TCTCGCGC |
|
RP712 |
CTATCGCT |
AGCGATAG |
|
RP713 |
CCTACACG |
CGTGTAGG |
|
RP714 |
GTAGTGTC |
GACACTAC |
|
RP715 |
TGTATGCA |
TGCATACA |
|
RP716 |
CCAGACTG |
CAGTCTGG |
|
RP717 |
AGGTGCCA |
TGGCACCT |
|
RP718 |
TCACCTTG |
CAAGGTGA |
|
RP719 |
GTATCTTT |
AAAGATAC |
|
RP720 |
CAGCTCCA |
TGGAGCTG |
|
RP721 |
TCGCCTTA |
TAAGGCGA |
|
RP722 |
CTAGTACG |
CGTACTAG |
|
RP723 |
AGCGTAGC |
GCTACGCT |
|
RP724 |
GAGCCTCG |
CGAGGCTC |
HB210118
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