Hieff NGS^® 384 CDI Primer for Illumina^®是Illumina^®高通量测序平台DNA文库构建专用接头引物试剂盒，共分为2个Set，每个Set包含二代测序建库中使用的PE adapter以及 8种i5 Index Primer和12种i7 Index Primer。 2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer，配合 Yeasen出品的DNA建库试剂盒使用可构建多达384种不同组合的双端index标记的文库。试剂盒中提供的所有试剂都经过严格的质量控制和功能验证，最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

产品组分

编号	名称	规格
12412ES02	PE Adapter	2×336 μL
	P 501-508	60 μL each
	P 701-712	40 μL each
12413ES02	PE Adapter	2×336 μL
	P 509-516	60 μL each
	P 713-724	40 μL each

运输与保存方法

冰袋运输。

所有组分-20°C保存，有效期18个月。

注意事项

1）本试剂盒中PE Adapter的浓度为15 μM，单个文库构建的接头使用量根据所用建库试剂盒进行调整。Index Primer的浓度为25 μM。

2）本试剂盒提供的PE Adapter为通用型短接头，需要通过PCR扩增获得完整的文库。Index Primer提供Barcode序列标签，用于高通量测序时区分样品。

3）本试剂盒每个Set包含8种i5 Index Primer (P 5xx)和12种i7 Index Primer (P 7xx)，相互组合可以构建96种不同组合的双端Index标记文库。2个Set共提供16种i5 Index Primer和24种i7 Index Primer。您可以使用Cat#12412中的i5 Index Primer（或i7 Index Primer）与Cat#12413中的i7 Index Primer（或i5 Index Primer）组合用以构建多达384种不同组合的双端Index标记文库。

4）切勿加热接头，应在室温让其缓慢溶解，实验室温度最好设置为20-25℃。接头避免反复冻融，建议分装保存，可短暂存放于4℃。

5）使用Hieff NGS^® 384 CDI Primer for Illumina^®试剂盒构建的测序文库结构如下：

  

6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
7）本产品仅作科研用途！

使用方法

1. 接头的使用：参照所用建库说明书中对不同投入量的推荐用量稀释至合适浓度使用。

2. Index Primer的使用：按照建库说明书中文库扩增体系配制反应体系（如下表），反应程序按照建库说明书中程序进行设置。

组分名称	体积（μL）
2× High Fidelity DNA PCR Mix	25
P 5xx	2.5
P 7xx	2.5
Adapter Ligated DNA	20
Total	50

序列信息

PE Adapter for Illumina：

5´-/5Phos/ GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGT*C -3´

5´-ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC*T-3´

i5 Index Primer for Illumina：

5´-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACAC[i5 Index]ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT -3´

i7 Index Primer for Illumina：

5´-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT[i7 Index]GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC-3´

[i5 Index]表示8 bp 的i5 Index序列，[i7 Index]表示8 bp 的i7 Index序列，各引物对应的Index名称、引物中包含的Index序列以及测序时对应的Index序列信息如下表所示：

 

I5 Index Primers	引物中的序列	Sample Sheet输入/测序时Index序列
		NovaSeq 6000 v1.0 reagents, MiSeq, HiSeq 2000/2500	NovaSeq 6000 v1.5 reagents， MiniSeq, NextSeq, HiSeq 3000/4000
P501	TATAGCCT	TATAGCCT	AGGCTATA
P502	ATAGAGGC	ATAGAGGC	GCCTCTAT
P503	CCTATCCT	CCTATCCT	AGGATAGG
P504	GGCTCTGA	GGCTCTGA	TCAGAGCC
P505	AGGCGAAG	AGGCGAAG	CTTCGCCT
P506	TAATCTTA	TAATCTTA	TAAGATTA
P507	CAGGACGT	CAGGACGT	ACGTCCTG
P508	GTACTGAC	GTACTGAC	GTCAGTAC
P509	GACCTGTA	GACCTGTA	TACAGGTC
P510	ATGTAACT	ATGTAACT	AGTTACAT
P511	GTTTCAGA	GTTTCAGA	TCTGAAAC
P512	CACAGGAT	CACAGGAT	ATCCTGTG
P513	TAGCTGCC	TAGCTGCC	GGCAGCTA
P514	AGCGAATG	AGCGAATG	CATTCGCT
P515	TATGCTGC	TATGCTGC	GCAGCATA
P516	AGAAGACT	AGAAGACT	AGTCTTCT

 

I7 Index Primers	引物中的序列	Sample Sheet输入/测序时Index序列
P701	CGAGTAAT	ATTACTCG
P702	TCTCCGGA	TCCGGAGA
P703	AATGAGCG	CGCTCATT
P704	GGAATCTC	GAGATTCC
P705	TTCTGAAT	ATTCAGAA
P706	ACGAATTC	GAATTCGT
P707	AGCTTCAG	CTGAAGCT
P708	GCGCATTA	TAATGCGC
P709	CATAGCCG	CGGCTATG
P710	TTCGCGGA	TCCGCGAA
P711	GCGCGAGA	TCTCGCGC
P712	CTATCGCT	AGCGATAG
P713	CCTACACG	CGTGTAGG
P714	GTAGTGTC	GACACTAC
P715	TGTATGCA	TGCATACA
P716	CCAGACTG	CAGTCTGG
P717	AGGTGCCA	TGGCACCT
P718	TCACCTTG	CAAGGTGA
P719	GTATCTTT	AAAGATAC
P720	CAGCTCCA	TGGAGCTG
P721	TCGCCTTA	TAAGGCGA
P722	CTAGTACG	CGTACTAG
P723	AGCGTAGC	GCTACGCT
P724	GAGCCTCG	CGAGGCTC

 

HB210118