产品简介

 

本产品用于动物组织细胞裂解以获取完整的细胞核。所获得的细胞核可以用于后续ATAC或者CUT&Tag实验。

 

组分信息

 

编号		组分名称	12514ES01	12514ES56
12514-A	●	Suspension Buffer	10 mL	200 mL
12514-B	●	10% Tween-20	100 μL	2 mL
12514-C	●	10% NP40	100 μL	2 mL
12514-D	●	1% Digitonin	100 μL	2 mL

 

储存条件

 

-25~-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

 

1. Lysis buffer配置
2. 将Suspension Buffer、10% Tween-20、10 % NP40、1 % Digitonin从冰箱拿出，冰上完全化冻后，涡旋混匀，短暂离心后，于无菌PCR管中，依据表1所示体系配制Lysis Buffer，配制好后冰上放置。

注：Suspension Buffer可放置于4℃保存，其他组分需放置-20℃保存。

表1 Lysis Buffer体系

名称	体积（μL）
Suspension Buffer	582 μL
10 % Tween-20	6 μL
10 % NP40	6 μL
1 % Digitonin	6 μL
Total	600 μL

 

2、样本预处理

方案一：

将培养皿至于提取预冷的金属块上，在培养皿中，用刀片将组织切碎成颗粒状（芝麻大小），加入600 μL预冷的Lysis Buffer，冰上静置10 min。随后用40 μm细胞筛过滤切碎的组织至1.5 mL EP管中，4℃，300 g离心5 min，去上清，用200 μL预冷的PBS重悬细胞核沉淀。取18 μL细胞核悬液，加入2 μL 0.4%台盼蓝溶液染色，显微镜下镜检，用血球计数板计算细胞核的浓度。(刀片切割：细胞核悬浮液体积200 μL，细胞核浓度约750个/μL；细胞筛研磨：细胞核悬浮液体积1000 μL，细胞核浓度约2000个/ μL)。根据计数结果，取50000细胞核悬液，加1000 μL预冷的PBS，4℃，300g离心3 min去除上清，收集细胞核。

收集得到的细胞核可按照ATAC试剂盒或者CUT&Tag试剂盒说明书进行后续实验。

方案二：

取一个干净的50mL离心管，插入冰中，去掉管盖，将40 μm细胞筛放在管口，用镊子将培养皿中清洗完成的组织放置于细胞筛中央处。取少量预冷的PBS（200 μL左右，覆盖组织块即可）滴加到组织处，用注射器黑色的活塞头轻轻的研磨分散组织（研磨2圈后，观察组织分散情况，每研磨2圈加入500 μL-1000 μL预冷的PBS冲洗组织块，总计研磨4-6圈左右，此时，50 mL离心管中溶液呈乳白色，细胞筛表面有一层组织覆盖）。将离心管中溶液转至1.5 mL EP管中，4℃，300 g离心5 min，去上清，用600 μL预冷的Lysis Buffer重悬细胞核沉淀，冰上静置5min。4℃，300 g离心5min，去上清，用1000 μL预冷的PBS重悬细胞核沉淀，随后用40 μm细胞筛过滤重悬后的细胞核至1.5 mL EP管中。

收集得到的细胞核可按照ATAC试剂盒或者CUT&Tag试剂盒说明书进行后续实验。

 

 

Ver.CN20240710