免疫印迹及免疫沉淀用（WB/IP）裂解液（无抑制剂），是一种非变性条件下裂解细胞或组织样本从而制备蛋白样品的裂解液，不含蛋白酶抑制剂和磷酸酯酶抑制剂，使用本裂解液时，用户可以根据具体用途自行添加特定抑制剂或者不添加抑制剂。裂解得到的蛋白样品可用于常规的Western、IP和Co-IP等实验。

 

产品信息

货号	20119ES60
规格	100 mL

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期1年。尽量避免反复冻融，建议分装后使用。

 

使用说明

(一) 细胞样品

1. 融解WB/IP裂解液（无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM，或根据实验需要加入总体效果更佳的蛋白酶抑制剂混合物（Cat#20123ES/20124ES）, 如检测磷酸化蛋白，还需加入磷酸酶抑制剂混合物（Cat#20109ES）

2. 贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液清洗细胞一遍(如果血清中的蛋白没有干扰，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成5×10⁵-1×10⁶个细胞/管，然后再裂解。因为大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

3. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加入100μL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到150 μL 或200 μL。

（二）组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解WB/IP裂解液（无抑制剂），混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM，或根据实验需要加入总体效果更佳的蛋白酶抑制剂混合物（Cat#20123ES/20124ES）, 如检测磷酸化蛋白，还需加入磷酸酶抑制剂混合物（Cat#20109ES）

3. 按照每20 mg组织加入100-200 μL裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000 g离心3-5 min，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得充分。

 

注意事项

1. 需自备PMSF或总体效果更佳的蛋白酶抑制剂混合物（Cat#20123ES/20124ES）、根据不同样本专用的蛋白酶抑制剂混合物（Cat#20134ES-20138ES）, 如检测磷酸化蛋白，还需加入磷酸酶抑制剂混合物（Cat#20109ES）
2. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
3. 用WB/IP裂解液（无抑制剂）裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定其蛋白浓度（Cat#20201ES/20200ES）。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
4. 本产品仅作科研用途。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

 

 

Ver.CN20240321