在肿瘤精准诊疗时代，NGS（下一代测序）已成为辅助诊断、伴随诊断、MRD监测、早筛早诊、遗传性肿瘤检测等应用场景的核心技术。而在整个NGS检测流程中，建库是至关重要的环节——建库的质量直接影响测序结果的准确性与可靠性。酶切法建库避免了传统的机械打断，无需打断仪，流程简便，可同时处理多个样本，更适合自动化建库，是目前应用最广泛的建库方法之一。

然而，肿瘤样本的特殊性对建库试剂盒提出了苛刻的要求，酶切法建库也存在酶切偏好性、假阳性、起始量适用范围窄等方法学局限。翌圣生物借助ZymeEditor酶改造及发酵纯化工艺平台，对酶进行进化改造，并不断优化反应体系，在经典产品的基础上全新升级，推出Hieff NGS^® OnePot Evo DNA Library Prep Kit（Cat#12193ES），让酶切法建库更高效、更精准！

肿瘤NGS检测中，从提取、建库、捕获到测序，每一个环节的效率都会影响到低频突变的检出率。基于NGS的肿瘤全景变异检测，对DNA建库试剂盒有四大核心要求：

▪低质量FFPE样本、微量cfDNA样本的建库成功率高；

▪接头连接效率高、文库扩增效率高；

▪片段化带来的假阳性低；

▪扩增无偏好性。

同时，肿瘤样本类型多样 ——FFPE、血浆、胸腹水、全血 / 骨髓血，样本质量参差不齐。以 12194ES 为代表的一步法建库试剂盒已在多家三方医检所客户中稳定应用，文库产量与酶切片段化大小均表现稳定；然而，针对低质量 FFPE 样本，若希望在保障稳定性的基础上进一步提升文库产量，12193ES 应运而生。

◆产品特点：

▪适用5 ng - 1 μg的基因组DNA、全长cDNA等样本，兼容FFPE DNA样本；

▪高质量片段化酶，可随机切割双链DNA，酶切片段偏好性低；

▪片段化、末端修复/加A一步完成；

▪强扩增效率的高保真酶，显著提高文库质量及产量；

◆实验流程

优势一：文库产量显著提升

以小牛gDNA为模板，考察5 ng - 1 μg不同投入量的建库表现。

数据显示，12193在5 ng微量起始到1 μg高通量投入的全范围内均能获得高产量的文库。

优势二：片段大小灵活可调

以Human gDNA 200 ng为模板，进行酶切时间梯度测试（3 - 20 min），不同酶切时间对应稳定的产物大小

◆酶切时间梯度：3min、5min、7min、10min、12min、15min、17min、20min

数据显示，通过简单调整酶切时间即可精准控制文库片段大小，满足不同Panel与测序平台的插入片段需求。

优势三：捕获数据质量全面优异

▸对比SupplierA（全外显子Panel，标准品NA12878）：

▸对比12194、Supplier B（FFPE样本靶向捕获，0.2M Panel，200 ng input，5 cycles）：

▸海外客户FFPE样本实测案例：

优势四：假阳性水平可控

FFPE回顾性临床样本验证（200 ng input，杂交捕获后对比）：

数据显示，12193相对Supplier D突变检出个数更少，说明假阳性更小；回顾性样本中两种试剂报告的突变个数一致，检测到的CNV和MSI结论完全一致。