实验所用试剂设备清单

货号	产品名称
19221ES	MolPure® FlashCell/Tissue Total RNA Kit快速细胞/组织总RNA提取试剂盒
—	无水乙醇

 

实验前准备

1．自备设备和试剂：台式离心机、水浴锅或金属浴，1.5 mL RNase-free离心管，液氮，无水乙醇等。

2．本试剂盒可以抑制RNase活性，不需要低温离心，所有的离心步骤常温进行。

3．首次使用前，在漂洗液W*（19221-E）瓶中加入标签指定量的无水乙醇 （5T/50T/100T分别加入5.2 mL/52 mL/100 mL无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。

 

操作步骤

1．新鲜组织(<30 mg)用液氮研磨，需磨成细粉后再加入500 μL裂解液LB，剧烈震荡20 sec，充分混匀。

2．将处理好的匀浆液加到DNA清除/RNA吸附通用柱上(柱子放在2 mL收集管内)，13,000 rpm离心1 min，收集含有RNA的滤液（gDNA在柱上，RNA在滤液中）。

3．向滤液中加入0.5倍滤液体积的无水乙醇（约250 μL），移液器吹打混匀。

4．将上述混合液全部加入新的DNA清除/RNA吸附通用柱中，13,000 rpm离心30 sec，弃掉滤液（此步RNA吸附在柱上）。

5．加入700 μL去蛋白液，室温30 sec，13,000 rpm离心30 sec，弃掉滤液，将DNA清除/RNA吸附通用柱重新放回2 mL收集管中。

6．加入500 µL漂洗液W*(请先确认已加入无水乙醇!)，13,000 rpm离心30 sec，弃掉滤液。

7．重复一遍步骤6，将DNA清除/RNA吸附通用柱重新放回2 mL收集管内。

8．空柱13,000 rpm离心2 min，除去残留漂洗液W*。

9．将DNA清除/RNA吸附通用柱放入新的1.5 mL RNase-free离心管中，在膜中央加入30-50 µL RNase-freeH2O，室温放置1 min，然后13,000 rpm离心1 min，收集滤液，即为RNA溶液。样品可置于-80℃长期保存。

 

质检结果—RNA浓度和纯度

样本序号	样本类型	浓度（nanodrop）ng/μL	A260/A280	A260/A230
1	小鼠皮肤	54.311	2.110	1.710
2	小鼠皮肤	73.823	2.130	0.790
3	小鼠肾	402.276	2.120	2.100
4	小鼠肾	589.770	2.120	2.200
5	小鼠肝	596.314	2.130	2.040
6	小鼠肝	360.895	2.120	1.320
7	小鼠肺	60.579	2.110	1.850
8	小鼠肺	121.850	2.110	2.200

 

质检结果—RNA完整度分析

 

数据来源：浙江某高校老师

 

实验结论

采用翌圣生物离心柱法快速细胞/组织总RNA提取试剂盒（19221ES）提取8个动物组织样本（2个小鼠皮肤，2个小鼠肾，2个小鼠肝，2个小鼠肺），通过Nanodrop检测RNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整度，结果显示：

1、小鼠肾和肝和肺浓度较高，纯度较好，可满足后续实验要求。

2、小鼠皮肤和肺的组织量较少，浓度较低，电泳条带较弱，但是任可以看到28S和18S条带，可满足后续实验要求。