产品说明书
FAQ
COA
已发表文献
MolPure® Cell RNA Kit 适用于从 96、24、12、6 孔板培养细胞 (< 1×106)总 RNA 提取。MolPure® DNA清除/RNA吸附通用柱为本公司特有新型材料，配合本公司独特的缓冲液配方可最大限度将细胞代谢物、蛋白等杂质去除。提取过程不需要用到有毒的酚、氯仿、β-巯基乙醇等有机溶剂，也不需要用到耗时的异丙醇或乙醇沉淀。操作简便，< 8 min即可完成培养细胞总RNA的提取。提取的 RNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种下游应用实验，如 RT-PCR、RT-qPCR、体外转录、分子克隆等。
产品组分
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编号 |
组分名称 |
19231ES08 (5 T) |
19231ES50 (50 T) |
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19231-A |
DNA清除/RNA吸附通用柱(MolPure® DNA removing/RNA binding Column C2) |
10个 |
100个 |
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19231-B |
2 mL收集管 (2 mL Collection Tube C2) |
10个 |
100个 |
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19231-C |
裂解液LB (LB Buffer C2) |
3 mL |
30 mL |
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19231-D |
去蛋白液PL (PL Buffer C2) |
4 mL |
40 mL |
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19231-E |
结合液BD* (BD Buffer C2*) |
1 mL |
10 mL |
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19231-F |
漂洗液W* (Wash Buffer C2*) |
1.3 mL |
13 mL |
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19231-G |
RNase-free H2O |
1 mL |
5 mL |
运输和保存方法
常温运输。室温避光保存，有效期24个月。2-8℃可保存更长时间。
注意事项
1. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
2. 注意观察各溶液是否有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可37℃温浴复溶至溶液澄清，避免影响使用效果。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
4. 本产品仅作科研用途！
实验前准备
1. 自备设备和试剂：台式离心机、水浴锅或金属浴，1.5 mL RNase-free离心管，液氮，无水乙醇等。
2. 本试剂盒可以抑制RNase活性，不需要低温离心，所有的离心步骤常温进行。
3. 首次使用前，在结合液BD*（19231-E）瓶中加入标签指定量的无水乙醇（5 T/50 T分别加入2.4 mL/24 mL无水乙醇），充分混匀后使用，并做好标记。
4. 首次使用前，在漂洗液W*（19231-F）瓶中加入标签指定量的无水乙醇（5 T/50 T分别加入5.2 mL/52 mL无水乙醇），
充分混匀后使用，并做好标记。
操作方法
一、样本预处理
- 针对贴壁细胞：不需消化，直接裂解；或离心收集细胞后，加入350 μL裂解液LB (< 1×106个细胞)，用移液器反复吹打混匀(直到看不到细胞团为止)。
- 针对悬浮细胞：直接离心收集细胞，加入350 μL裂解液LB (< 1×106个细胞)，用移液器反复吹打混匀(直到看不到细胞团为止)。
二、RNA提取
1. 将处理好的匀浆液加到DNA清除/RNA吸附通用柱上(柱子放在2 mL收集管内)，13,000 rpm离心1 min，收集含有RNA的滤液。
2. 估算滤液体积后加入等体积的结合液BD*(请先确认已加入无水乙醇!)，立即轻柔吹打混匀。
3. 将上述混合液全部加入新的DNA清除/RNA吸附通用柱中，13,000 rpm离心30 s，弃掉滤液。
4. 加入700 μL去蛋白液，室温30 s，13,000 rpm离心30 s，弃掉滤液，将DNA清除/RNA吸附通用柱重新放回2 mL收集管中。
5. 加入500 µL漂洗液W*(请先确认已加入无水乙醇!)，13,000 rpm离心30 s，弃掉滤液。
6. 重复一遍步骤5，将DNA清除/RNA吸附通用柱重新放回2 mL收集管内。
7. 空柱13,000 rpm离心2 min，除去残留漂洗液W*。
8. 将DNA清除/RNA吸附通用柱放入新的1.5 mL RNase-free离心管中，在膜中央加入30-50 µL RNase-free H2O，室温放置1 min，然后13,000 rpm离心1 min，收集滤液，即为RNA溶液。样品可置于-80℃长期保存。
【注】：可通过以下方式提高回收产量：①65℃预热RNase-free H2O；②将RNA滤液再次上柱，室温放置1 min后，洗脱。
HB230104
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