还在为克隆阳性率低而烦恼吗？

 

 

传统的酶切克隆：克隆载体的多克隆位点需携带可用的单一酶切位点，同时酶切位点若存在于外源片段也会极大程度限制克隆。此外，还需要购买各式各样不同的内切酶。

同源重组克隆：仅靠同源臂进行互补配对。

传统的酶切克隆：由于酶切位点的限制和酶切位点之间存在着一定的距离和交叉覆盖，可组装的片段有限，酶切克隆通常需要分多次拼接，一般只能拼接2-3个片段，耗时耗力。

同源重组克隆：可同时拼接4-6个片段，并且只需要将所有片段混在一个试剂管中反应即可。

传统的酶切克隆：传统的片段和载体酶切均需要2-4小时，此外还需要对相关产物进行末端补平、磷酸化、产物纯化等一系列操作。为保证连接成功，还需在16℃条件下过夜连接。

同源重组克隆：仅需PCR和胶回收，连接体系反应时间为5-30min左右，连接单个和多个片段的时间一致。相比于传统酶切克隆，可节约1天左右的时间。

• 定向：可满足1-7个DNA片段的定向同源重组克隆

• 简便：片段无需酶切，多片段连接一管内即可完成

• 快速：最快5分钟完成连接反应

• 高效：菌落数多，克隆阳性率可达95%以上

• 超长：载体+片段连接长度可达25kb以上

• 小体系：低至5-6μL的连接总体系

图1. 在6 μL小体系非复苏感受态下，连接10 ng低投入量单片段基因。结果显示，10923ES性能好于竞品，连接效率高，菌落数多，阳性率达100%。A-B：重组转化平板。载体（10 kb）和插入片段（1 kb）摩尔比为1:2。C：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES。

图2. 两片段（3 kb）连接。结果显示，10923ES菌落数多，阳性率100%。A：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（3 kb）摩尔比为1:2。B：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES。

图3. 三片段（4.4 kb）连接。结果显示，10923ES菌落数多，阳性率100%。A：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（4.4 kb）摩尔比为1:2。B：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌落PCR长度2.6 kb。

图4. 六片段（7.6 kb）连接。结果显示，10923ES产品性能好于竞品，菌落数多，阳性率100%。A-B：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（7.6 kb）摩尔比为1:2。C：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌P长度2.6 kb。

图5. 超长片段连接。结果显示，10923ES菌落数多，阳性率100%。A：重组转化平板。载体（21 kb）和插入片段（4.5 kb）摩尔比为1:2。B：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES。

图6. 分别连接低浓度的五片段和六片段。结果显示，10923ES在低浓度下连接性能稳定，菌落数多，阳性率100%。A-B：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（5片段共5.6 kb、六片段共7.6 kb）摩尔比为1:2。C-D：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌P长度2.6 kb。

图7：10923ES超小体系连接1 kb单片段，连接效率高，菌落数多，阳性率达100%。3 μL总体系连接，10923ES的投入量可低至1 μL。A&C&E&I：50 ng载体（11.6 kb）+10 ng片段（1 kb）；G：25 ng载体+5 ng片段。B&D&F&H&J：插入片段PCR鉴定电泳图。

图8：10923ES升级版冻融无影响，通过反复的完全冰冻和4℃解冻进行测试，结果显示产品冻融对产品不会产生影响。以反复冻融40次的试剂盒分别连接单片段和六片段，同比正常保存对照，性能无差异。