Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/μL) 虾碱性磷酸酶

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产品简介

 

Alkaline Phosphatase,中文名碱性磷酸酶,可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除,常用于阻止载体的自连作用:在分

子克隆实验中,DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在,载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团,因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止,提高了目的片段插入率。另外,碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板。

本品为虾来源的碱性磷酸酶,可以降解几乎所有磷酸单酯,但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。该酶作用于末端去磷酸化,无论末端为粘端,还是平端。SAP也可以用来降解PCR反应中的dNTP,用于后续测序和SNP分析。

 

产品组分

 

组分编号

组分名称

10322ES72

10322-A

Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/µL)

250 U

10322-B

10×SAP buffer

1 mL

 

产品性质

 

来源(Source)

来自毕赤酵母,克隆有北极虾(Pandalus rorealis)的虾碱性磷酸酶基因

质量控制(Quality Control)

无核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶污染

纯度(Purity)

95%

热灭活(Thermal Inactivation)

65℃温浴5 min,活性完全不可逆丧失

活性定义(Unit definition)

25℃条件下,30分钟能使1 μg经HindⅢ(产生5’突出末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量定位为1个活力单位。

 

储存条件

 

-25~-15℃保存,有效期3

 

注意事项

 

  1. 1×SAP Buffer: 50mM Bis-Tris HCl (pH 6.0),1 mM MgCl20.1 mM ZnCl225℃温育。
  2. 热失活:65℃加热5分钟,不可逆失活。当完成去磷酸化反应后,无需纯化产物,可以直接用于后续连接反应。
  3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  4. 本产品仅作科研用途!

 

使用说明

 

DNA去磷酸化

  1. EP管中加入下列试剂*:

组分

体积(μL

DNA片段**

1 pmol

10×SAP buffer

2 µL

Shrimp Alkaline Phosphatase (1 U/µL)

1 µL

无菌 ddH2O

Up to 20 µL

*可根据比例相应放大反应体系。

**1 pmol DNA 片段量约相当于1 μg 3 kb大小的质粒。

2. 混匀上述试剂,于25℃孵育30 min。

3. 将EP管65℃,5 min温浴,终止反应。

 

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产品名称

货号

规格

Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP)小牛肠碱性磷酸酶

10321ES80

1000 U

 

 

Ver.CN20250219

 

400-6111-883