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产品简介
Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分
子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’端无磷酸基团，因而不可以和自身3’端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板。
本品为虾来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。该酶作用于末端去磷酸化，无论末端为粘端，还是平端。SAP也可以用来降解PCR反应中的dNTP，用于后续测序和SNP分析。
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
10322ES72 |
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10322-A |
Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/µL) |
250 U |
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10322-B |
10×SAP buffer |
1 mL |
产品性质
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来源（Source） |
来自毕赤酵母，克隆有北极虾（Pandalus rorealis）的虾碱性磷酸酶基因 |
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质量控制（Quality Control） |
无核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶污染 |
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纯度（Purity） |
＞95% |
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热灭活（Thermal Inactivation） |
65℃温浴5 min，活性完全不可逆丧失 |
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活性定义（Unit definition） |
在25℃条件下，30分钟能使1 μg经HindⅢ(产生5’突出末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量定位为1个活力单位。 |
储存条件
-25~-15℃保存，有效期3年。
注意事项
- 1×SAP Buffer: 50mM Bis-Tris HCl (pH 6.0)，1 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2，25℃温育。
- 热失活：65℃加热5分钟，不可逆失活。当完成去磷酸化反应后，无需纯化产物，可以直接用于后续连接反应。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
- 本产品仅作科研用途！
使用说明
DNA去磷酸化
- 在EP管中加入下列试剂*：
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组分 |
体积（μL） |
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DNA片段** |
1 pmol |
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10×SAP buffer |
2 µL |
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Shrimp Alkaline Phosphatase (1 U/µL) |
1 µL |
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无菌 ddH2O |
Up to 20 µL |
*可根据比例相应放大反应体系。
**1 pmol DNA 片段量约相当于1 μg 3 kb大小的质粒。
2. 混匀上述试剂，于25℃孵育30 min。
3. 将EP管65℃，5 min温浴，终止反应。
相关产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
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Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP)小牛肠碱性磷酸酶 |
10321ES80 |
1000 U |
Ver.CN20250219
