产品描述

Alkaline Phosphatase，中文名碱性磷酸酶，可将DNA、RNA的5’端磷酸基团去除，常用于阻止载体的自连作用：在分子克隆实验中，DNA连接酶催化DNA连接时需要有磷酸基团的存在，载体在经酶切后会在切点端保留一个磷酸基团。而载体经碱性磷酸酶去磷酸化后因5’ 端无磷酸基团，因而不可以和自身3’ 端连接。因此连接反应中载体本身会优先发生的连接反应被阻止，提高了目的片段插入率。另外，碱性磷酸酶还可制备用于5’端标记的DNA模板。

本品为虾来源的碱性磷酸酶，可以降解几乎所有磷酸单酯，但是该酶不能水解磷酸二酯或磷酸三酯。该酶作用于末端去磷酸化，无论末端为粘端，还是平端。SAP 也可以用来降解PCR 反应中的dNTP，用于后续测序和SNP分析。

 

产品组分

组分编号	组分名称	产品编号/规格
		10322ES72（250 U）
10322-A	Shrimp Alkaline Phosphatase (SAP) (1 U/µL)	250 U
10322-B	10×SAP buffer	1 mL

 

产品性质

来源（Source）	来自毕赤酵母，克隆有北极虾（Pandalus rorealis）的虾碱性磷酸酶基因
质量控制（Quality Control）	无核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶污染
纯度（Purity）	＞95%
热灭活（Thermal Inactivation）	65℃温浴5 min，活性完全不可逆丧失
活性定义（Unit definition）	在25℃条件下，30分钟能使1 μg经HindⅢ(产生5’突出末端)消化的pUC19 DNA去磷酸化所需的酶量定位为1个活力单位。

 

运输和保存方法

冰袋运输。-20℃保存，有效期3年。

 

注意事项

1）1×SAP Buffer: 50mM Bis-Tris HCl (pH 6.0)，1 mM MgCl2，0.1 mM ZnCl2，25℃温育。

2）热失活：65℃加热5分钟，不可逆失活。当完成去磷酸化反应后，无需纯化产物，可以直接用于后续连接反应。

3）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

4) 本产品仅作科研用途!

 

使用方法

DNA去磷酸化

① 在EP管中加入下列试剂*：

组分	体积
DNA 片段**	1 pmol
10×rSAP buffer	2 µL
Shrimp Alkaline Phosphatase (1 U/µL)	1 µL
无菌ddH2O	Up to 20 µL

【*】可根据比例相应放大反应体系。

【**】1 pmol DNA片段量约相当于1 ug 3kb大小的质粒。

② 混匀上述试剂，于25℃孵育30 min。

③ 将EP管65℃，5 min温浴，终止反应。

 

相关产品

产品名称	货号	规格
Alkaline Phosphatase (30 U/μL), Calf Intestine (CIAP) 小牛肠碱性磷酸酶	10321ES80	1000 U
Exonuclease I (E. coli)  I型核酸外切酶	10320ES81/93	1500 U/15000 U

 

HB220114