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神经营养素-3（NT-3）是神经营养因子NGF家族的一员，其是中枢神经系统和外周神经系统中特定神经元亚群分化和存活所必需的。NT-3 cDNA编码257个氨基酸残基的前体蛋白，该前体蛋白具有信号肽和前蛋白，其被切割以产生119个氨基酸残基的成熟NT-3。成熟NT-3的氨基酸序列在人、小鼠和大鼠中是相同的。神经营养因子家族由至少四种蛋白质组成，包括NGF、BDNF、NT-3和NT-4/5。这些分泌的细胞因子被合成为前肽，其被蛋白水解处理以产生成熟蛋白。所有神经营养因子都有六个保守的半胱氨酸残基，它们参与三个二硫键的形成，并且在氨基酸水平上都具有大约55%的序列同一性。与NGF类似，具生物活性的NT-3预测可能为非共价连接的同源二聚体。
翌圣Human NT-3 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定人血清、血浆和细胞培养上清中的神经营养素-3(Human NT-3)。特异性抗神经营养素-3抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的神经营养素-3与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体（生物素标记）孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(HRP标记链霉亲和素)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中神经营养素-3的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 主波长，630nm次波长测定吸光度值。
产品信息
|
货号 |
97067ES48 / 97067ES96 |
|
规格 |
48 T / 96 T |
|
检测范围 |
31.25-2000 pg/mL |
|
检测方法 |
双抗夹心法 |
|
检测物种 |
人 |
|
检测时长 |
4小时30分钟 |
|
灵敏度 |
22.17 pg/mL |
|
稀释线性 |
80.9-122.4% |
|
回收率 |
83.2-119.2% |
|
板内差 |
5.3% |
|
板间差 |
6.7% |
实验数据
- 标曲数据
|
浓度（pg/mL） |
显色值 |
平均值 |
校准值 |
||
|
2000 |
2.979 |
2.912 |
2.945 |
2.949 |
|
|
1000 |
2.089 |
2.020 |
2.054 |
2.042 |
|
|
500 |
1.196 |
1.061 |
1.129 |
1.146 |
|
|
250 |
0.589 |
0.543 |
0.566 |
0.562 |
|
|
125 |
0.306 |
0.264 |
0.285 |
0.278 |
|
|
62.5 |
0.168 |
0.171 |
0.169 |
0.158 |
|
|
31.25 |
0.112 |
0.107 |
0.109 |
0.111 |
|
|
0 |
0.072 |
0.071 |
0.071 |
/ |
|
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
- 灵敏度检测
神经营养素-3的最低检测限为22.17 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测30次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
|
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
8 |
8 |
8 |
30 |
30 |
30 |
|
|
平均值 |
1004.10 |
218.79 |
58.04 |
1022.16 |
219.94 |
56.91 |
|
标准差 |
63.09 |
5.44 |
4.10 |
74.29 |
9.05 |
4.91 |
|
变异系数（%） |
6.28 |
2.49 |
7.07 |
7.27 |
4.12 |
8.63 |
- 回收率检测
通过不同水平的神经营养素-3添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
血清 |
107.6 |
95.5-118.7 |
|
血浆 |
107.2 |
83.2-119.2 |
|
细胞培养上清 |
107.1 |
92.7-117.2 |
- 稀释线性检测
|
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
113.8 |
107.9-122.4 |
|
1:04 |
112.1 |
110.2-114.0 |
|
1:08 |
105.6 |
96.1-118.1 |
|
1:16 |
94.6 |
82.6-105.4 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
107.8 |
104.2-111.4 |
|
1:04 |
110.5 |
103.6-116.7 |
|
1:08 |
112.9 |
110.5-115.5 |
|
1:16 |
85.3 |
82.4-88.4 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
96.7 |
95.9-97.5 |
|
1:04 |
89.6 |
80.9-96.7 |
|
1:08 |
100.0 |
95.6-108.9 |
|
1:16 |
87.8 |
82.3-95.1 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干样本，背景不详。
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
|
细胞培养上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
|
血清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
|
血浆 |
8 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内的31.25 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组人神经营养素-3。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant Human: |
|
β-NGF |
|
BDNF |
|
CNTF |
|
GDNF |
|
NT-4 |
检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
|
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
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稀释方法不恰当 |
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
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移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
Ver.CN20231106
