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脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）是1982年Barde等首先在猪脑中发现的一种具有神经营养作用的蛋白质，属于NGF家族神经营养因子的成员，是中枢神经系统和周围神经系统中特定神经元亚群分化和存活所必需的。神经营养蛋白家族由至少四种蛋白质组成，包括NGF，BDNF，NT-3和NT-4/5。这些分泌的细胞因子被合成为前前肽，其被蛋白水解处理以产生成熟的蛋白质。所有神经营养因子都有六个保守的半胱氨酸残基，它们参与三个二硫键的形成，并且在氨基酸水平上都共享约55%的序列同源性。与NGF类似，生物活性BDNF被预测为非共价连接的同源二聚体。BDNF可以与低亲和力细胞表面受体LNGFR结合，该受体也结合其他神经营养因子，如NGF，NT-3和NT-4。然而，BDNF通过高亲和力细胞表面受体gp145/trkB发出信号来介导其神经营养特性。
翌圣Human BDNF ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒，用于定量测定血清、血浆中的人脑源性神经营养因子(Human BDNF)。特异性抗人脑源性神经营养因子抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本，经过孵育，样本中存在的人脑源性神经营养因子与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后，加入检测抗体孵育结合，经洗涤，再加入酶结合物(Streptavidin-HRP)孵育结合。洗涤后，加入显色底物 TMB，避光显色。颜色反应的深浅与样本中人脑源性神经营养因子的浓度成正比。加入终止液终止反应，在450 nm 波长(参考波长570 - 630 nm)测定吸光度值。
产品信息
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货号 |
97055ES48 / 97055ES96 |
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规格 |
48 T / 96 T |
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检测范围 |
15.63-1000 pg/mL |
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检测方法 |
双抗夹心法 |
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检测物种 |
人 |
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检测时长 |
4.5小时 |
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灵敏度 |
10.1 pg/mL |
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稀释线性 |
83 - 117% |
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回收率 |
81 - 117% |
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板内差 |
5.5% |
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板间差 |
9.6% |
实验数据
- 标曲数据
数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。
- 灵敏度检测
BDNF的最低检测限为10.1 pg/mL，通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
- 精密度检测
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定8次，评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测24次，评估酶标板间的精密度。
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项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
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样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
|
8 |
8 |
8 |
24 |
24 |
24 |
|
|
平均值 |
467.3 |
153.2 |
50.5 |
429.1 |
138.2 |
52.8 |
|
标准差 |
22.3 |
7.9 |
3.4 |
32.6 |
14.9 |
5.6 |
|
变异系数（%） |
4.8% |
5.2% |
6.7% |
7.6% |
10.8% |
10.5% |
- 回收率检测
通过不同水平的BDNF添加于样本中来测定回收率，其回收率如下:
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样本类型 |
平均回收率(%) |
范围（%） |
|
血清 |
90.7 |
82-99.6 |
|
血浆 |
103.7 |
97.7-116.6 |
|
细胞培养上清 |
98.3 |
80.5-113.3 |
- 稀释线性检测
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血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
97.1 |
87.3-103.5 |
|
1:04 |
97.9 |
92.2-104.1 |
|
1:08 |
103.1 |
88.6-115 |
|
1:16 |
100.4 |
88.6-115.4 |
|
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
107.1 |
97.3-116.9 |
|
1:04 |
101.4 |
94.3-108.9 |
|
1:08 |
100.5 |
86.5-116.8 |
|
1:16 |
108.2 |
92.5-116.6 |
|
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围（%） |
|
1:02 |
97.1 |
90.3-100.8 |
|
1:04 |
98.6 |
96.7-101.8 |
|
1:08 |
91.4 |
86.5-100.5 |
|
1:16 |
88.4 |
82.7-99.4 |
- 样本值
应用本试剂盒，检测若干健康志愿者的样本，志愿者的用药史不详。
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样本类型 |
样本数目 |
平均值（pg/mL） |
样本值（pg/mL） |
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血清 |
8 |
17.5 |
7.9-29.4 |
|
血浆 |
8 |
12.7 |
3.8-23.2 |
|
细胞培养上清 |
4 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得15.63 pg/mL
- 测定特异性
本试剂盒识别天然和重组人脑源性神经营养因子。下述因子进行了特异性的评估，没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
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Recombinant human: |
Recombinant Mouse: |
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IL-1α |
CNTF |
IL-1β |
β-NGF |
|
IL-1β |
β-NGF |
IL-2 |
NGF R |
|
IL-2 |
NGF R |
IL-4 |
NT-4 |
|
IL-4 |
NT-3 |
IL-6 |
TrkB |
|
IL-5 |
NT-4 |
IL-10 |
TrkC |
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IL-6 |
TrkA |
IL-12 |
|
|
IL-8 |
TrkB |
|
|
|
IL-10 |
TrkC |
|
|
|
IL-12 |
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检测简图
疑问解答
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问题 |
造成原因 |
解决方法 |
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标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器，按时校准，仔细操作，充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
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稀释方法不恰当 |
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显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间，样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
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移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
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CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序；如果使用洗板机，检查所有的端口是否堵塞。 |
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受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
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灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |
