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产品描述
蛋白电泳经常使用聚丙烯酰胺凝胶来实现蛋白分离，此类凝胶一般由浓缩胶和分离胶两部分组成，前者起到将蛋白样品进行浓缩的作用，后者则是根据凝胶所使用的丙烯酰胺单体和N,N-亚甲基双丙烯酰胺（甲叉丙烯酰胺）交联剂的浓度不同从而分离不同大小范围的蛋白质。
本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶设备和蒸馏水即可配胶，大大简化了制胶过程，货号20328ES50可配制30-50块常规大小的凝胶，20328ES72可配制150~250块常规大小的凝胶。
翌圣为您提供Western Blot实验整体解决方案，相关产品选购请参考：WB实验系列产品-选购指南
产品组分
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组分编号 |
组分名称 |
产品编号/规格 |
产品编号/规格 |
保存方式 |
|
20328ES50（30~50 gels） |
20328ES72（150~250 gels） |
|||
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20328-A |
30%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺，29:1 |
100 mL |
500 mL |
4℃避光 |
|
20328-B |
4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH 8.8 |
70 mL |
350 mL |
4℃ |
|
20328-C |
4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液，pH 6.8 |
30 mL |
90 mL |
4℃ |
|
20328-D |
APS 过硫酸铵 |
0.5 g |
2.5 g |
4℃ |
|
20328-E |
TEMED 四甲基二乙胺 |
0.6 mL |
2.8 mL |
4℃避光 |
运输和保存方法
室温运输。4℃避光保存，有效期12个月。
注意事项
1.丙烯酰胺溶液和TEMED有毒，请适当防护。
2. APS溶液不稳定，当配制成10%溶液后，分装成-20℃冻存。尽量减少室温存放时间，以防失效。若是发现凝胶聚合时间明显延长，需要更换使用其它-20℃冻存或者新鲜配置的10%APS。
3.TEMED易挥发，使用后请盖紧瓶盖。
4.凝胶凝聚的速度与温度、光照、以及TEMED、APS的用量关系密切。在其他组分用量不变的前提下，可通过适当调节TEMED以及APS的用量，控制现有室温条件下凝胶凝聚的速度。可参考附件的量进行相应的调整。
5.温度较低时，4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液和4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液中的SDS可能析出。此时需水浴温育，并在完全溶解和混匀后使用。
6.凝胶配制过程，特别是液体混匀步骤，需尽量避免气泡的产生。
7.在分离胶上层进行水压时需小心操作，加水速度不宜过快。
8.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
9.本产品仅作科研用途！
使用方法
1 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度【参考附表1】
2 按照附表2配制相应浓度的SDS-PAGE分离胶，制胶程序如下：
2.1 将不同体积的30% Acr-Bis(29:1)、4×分离胶缓冲液和蒸馏水在试管或者小烧杯内混合；
2.2 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免气泡产生；
2.3 在装好的制胶模具中灌入适量分离胶溶液，对于mini胶，分离胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可。然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5cm的水层，从而压平凝胶表面；
2.4 静置30-60 min，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面，表面凝胶已聚合；
3 按照附表3配制SDS-PAGE浓缩胶，制胶程序如下：
3.1 去除覆盖在分离胶上的水层。
3.2 将不同体积的30% Acr-Bis(29:1)、4×浓缩胶缓冲液和蒸馏水在试管或者小烧杯内混合；
3.3 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
3.4 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
3.5 将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3.6 静置10-20 min，等待浓缩胶聚合。
3.7 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
3.8 可用电泳缓冲液吹走孔内残留的一些胶液【可选】，然后进行上样和后续的常规电泳操作。
附表1. 不同浓度SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围
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SDS-PAGE分离胶浓度 |
最佳分离范围 |
|
6%凝胶 |
50-150 KD |
|
8%凝胶 |
30-90 KD |
|
10%凝胶 |
20-80 KD |
|
12%凝胶 |
12-60 KD |
|
15%凝胶 |
10-40 KD |
附表2. 不同浓度SDS-PAGE分离胶配制体系
|
分离胶浓度 |
凝胶体积(mL) |
所需各组分体积（单位：mL） |
||||
|
蒸馏水 |
30% Acr-Bis（29:1） |
4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH 8.8 |
10% APS |
TEMED |
||
|
6% |
5 |
2.7 |
1.0 |
1.25 |
0.05 |
0.004 |
|
10 |
5.4 |
2.0 |
2.5 |
0.1 |
0.008 |
|
|
15 |
8.1 |
3.0 |
3.75 |
0.15 |
0.012 |
|
|
20 |
10.8 |
4.0 |
5.0 |
0.2 |
0.016 |
|
|
30 |
16.2 |
6.0 |
7.5 |
0.3 |
0.024 |
|
|
50 |
27.0 |
10.0 |
12.5 |
0.5 |
0.040 |
|
|
8% |
5 |
2.37 |
1.33 |
1.25 |
0.05 |
0.003 |
|
10 |
4.7 |
2.7 |
2.5 |
0.1 |
0.006 |
|
|
15 |
7.1 |
4.0 |
3.75 |
0.15 |
0.009 |
|
|
20 |
9.5 |
5.3 |
5.0 |
0.2 |
0.012 |
|
|
30 |
14.2 |
8.0 |
7.5 |
0.3 |
0.018 |
|
|
50 |
23.7 |
13.3 |
12.5 |
0.5 |
0.030 |
|
|
10% |
5 |
2.03 |
1.67 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
|
10 |
4.07 |
3.33 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15 |
6.1 |
5.0 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20 |
8.1 |
6.7 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
30 |
12.2 |
10.0 |
7.5 |
0.3 |
0.012 |
|
|
50 |
20.3 |
16.7 |
12.5 |
0.5 |
0.020 |
|
|
12% |
5 |
1.7 |
2.0 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
|
10 |
3.4 |
4.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15 |
5.1 |
6.0 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20 |
6.8 |
8.0 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
30 |
10.2 |
12.0 |
7.5 |
0.3 |
0.012 |
|
|
50 |
17.0 |
20.0 |
12.5 |
0.5 |
0.020 |
|
|
15% |
5 |
1.2 |
2.5 |
1.25 |
0.05 |
0.002 |
|
10 |
2.4 |
5.0 |
2.5 |
0.1 |
0.004 |
|
|
15 |
3.6 |
7.5 |
3.75 |
0.15 |
0.006 |
|
|
20 |
4.8 |
10.0 |
5.0 |
0.2 |
0.008 |
|
|
30 |
7.2 |
15.0 |
7.5 |
0.3 |
0.012 |
|
|
50 |
12.0 |
25.0 |
12.5 |
0.5 |
0.020 |
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附表3. 5% SDS-PAGE浓缩胶配制体系
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凝胶体积（mL） |
所需各组分体积（单位：mL） |
||||
|
蒸馏水 |
30% Acr-Bis（29:1） |
4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液，pH 6.8 |
10% APS |
TEMED |
|
|
2 |
1.14 |
0.34 |
0.5 |
0.02 |
0.002 |
|
4 |
2.28 |
0.68 |
1.0 |
0.04 |
0.004 |
|
6 |
3.42 |
1.02 |
1.5 |
0.06 |
0.006 |
|
8 |
4.56 |
1.36 |
2.0 |
0.08 |
0.008 |
相关产品
|
产品名称 |
货号 |
规格 |
|
4×Tris-HCl-SDS Separating Gel Buffer, pH8.8 （4×Tris-HCl-SDS分离胶缓冲液，pH8.8） |
20320ES76 |
500ml |
|
4×Tris-HCl Separating Gel Buffer, pH8.8 4×Tris-HCl分离胶缓冲液, pH8.8 |
20321ES76 |
500ml |
|
4×Tris-HCl-SDS Stacking Gel Buffer, pH6.8 （4×Tris-HCl-SDS浓缩胶缓冲液， pH6.8 ） |
20322ES76 |
500ml |
|
4×Tris-HCl Stacking Gel Buffer, pH6.8 4×Tris-HCl浓缩胶缓冲液, pH6.8 |
20323ES76 |
500ml |
|
20324ES62 |
125 mini gels |
|
|
20325ES62 |
125 mini gels |
|
|
20326ES62 |
125 mini gels |
|
|
20327ES62 |
125 mini gels |
HB220531
