Exonuclease III是一种核酸外切酶，该酶作用于双链DNA，从3’OH末端方向逐步切去单核苷酸。该酶最适底物是平末端或5'末端突出的DNA，但也可以作用于双链DNA切刻位点产生单链缺口。由于对单链DNA无活性，因此该酶难以切割3'突出末端。3'到5'外切酶活性对底物的消化程度随3'突出末端的长度而变化，四碱基或更长的突出末端难以被切割。这种特

性可以用于生产特定方向的单链DNA，将线性化DNA设计成为一端为不切割末端（3'突出端），另一端则设计为易切割末端（平端或5'突出端），此时Exonuclease III将仅消化一条链。

Exonuclease III的活性部分依赖DNA双螺旋结构，并根据序列的不同而有差异（C＞A=T＞G）。此外，该酶也有RNase H、3’-磷酸酶、脱嘌呤/嘧啶（AP）位点特异性核酸内切酶活性。

 

产品信息

货号	14525ES90 / 14525ES96
规格	5,000 U / 25,000 U

 

组分信息

组分编号	组分名称	14525ES90	14525ES96
14525-A	Exonuclease III (100 U/μL)	50 μL	5×50 μL
14525-B	10× Exo III Buffer	500 μL	5× 500 μL

 

储存条件

-25~-15℃保存，有效期2年。

 

使用说明

酶切反应操作步骤

1. 于冰上配置如下反应体系

组分	使用量
DNA	~ 5 μg
10× Exo III Buffer	5 μL
Exonuclease III (100 U/μL)	0.5 μL
Nuclease-Free Water	to 50 μL

2. 37℃孵育30 min。

3. 加入终浓度为11 mM的EDTA终止反应或70℃孵育30 min使Exonuclease III失活。

4. 琼脂糖电泳检测双链DNA酶切结果。

 

注意事项

1. Exonuclease III 不能切割硫代磷酸酯键。因此，也可以通过引入一个 α-硫代磷酸核苷酸将DNA分子的一端保护起来，以

进行单向切割。这种特性可以用于对一端为钝化末端（3’突出端），另一端是敏感末端（平端或 5’突出端）的线性DNA分子进行单方向切割。

2. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3. 本产品仅用作科研用途。

Ver.CN20231212