趋化因子配体(CCL17),也称为胸腺活化调节趋化因子(TARC),是CC趋化因子家族的小分子量细胞因子。CCL17编码基因连同其它趋化因子CCL22和CX3CL1在人类中位于第16号染色体。CCL17组成性表达于胸腺中,在植物血凝素(PHA)刺激的外周血单个核细胞中瞬时表达。该趋化因子特异性地与T细胞结合,并通过与趋化因子受体CCR4结合展现其趋化作用。
翌圣Human CCL17 ELISA(酶联免疫吸附测定)试剂盒是一种体外酶联免疫吸附测定试剂盒,用于定量测定血清、血浆和细胞培养上清中的人趋化因子配体17 (Human CCL17)。特异性抗人趋化因子配体17 抗体预包被在高亲和力的酶标板上。酶标板孔中加入标准品、待测样本,经过孵育,样本中存在的人趋化因子配体17 与固相抗体结合。洗涤去除未结合的物质后,加入检测抗体(生物素标记)孵育结合,经洗涤,再加入酶结合物(HRP标记链霉亲和素)孵育结合。洗涤后,加入显色底物 TMB,避光显色。颜色反应的深浅与样本中人趋化因子配体17 的浓度成正比。加入终止液终止反应,在450 nm 主波长,630nm次波长测定吸光度值。
产品信息
货号 |
97008ES48 / 97008ES96 |
规格 |
48 T / 96 T |
检测范围 |
6.25-400 pg/mL |
检测方法 |
双抗夹心法 |
检测物种 |
人 |
检测时长 |
4小时40分钟 |
灵敏度 |
0.176 pg/mL |
稀释线性 |
77.8 - 118.6% |
回收率 |
76.7 - 119.5% |
板内差 |
3.7% |
板间差 |
4.1% |
实验数据
数据拟合绘制标准曲线,生成的标曲用于实验数据分析。
标准曲线图
人趋化因子配体17 的最低检测限为0.176 pg/mL,通过使用重复检测20次零孔OD值的均值与标准差计算得出。
酶标板内精密度
3个已知浓度的样本酶标板内重复测定20次,评估酶标板内的精密度。
酶标板间精密度
3个已知浓度的样本酶标板间重复检测36次,评估酶标板间的精密度。
项目 |
板内精密度 |
板间精密度 |
||||
样本 |
1 |
2 |
3 |
1 |
2 |
3 |
20 |
20 |
20 |
36 |
36 |
36 |
|
平均值 |
322.2 |
76.2 |
20.1 |
318.8 |
80.6 |
19.2 |
标准差 |
12.2 |
2.1 |
0.9 |
3.1 |
5.3 |
0.9 |
变异系数(%) |
3.8 |
2.8 |
4.5 |
1.0 |
6.6 |
4.7 |
通过不同水平的人趋化因子配体17 添加于样本中来测定回收率,其回收率如下:
样本类型 |
平均回收率(%) |
范围(%) |
血清 |
100.4 |
91.1-113.4 |
血浆 |
96.3 |
76.7-119.5 |
细胞培养上清 |
106.9 |
99.8-116.0 |
血清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
94.5 |
90.6-97.8 |
1:04 |
89.4 |
84.0-96.6 |
1:08 |
88.4 |
77.8-95.2 |
1:16 |
83.5 |
81.3-87.4 |
血浆稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
102.6 |
84.2-113.8 |
1:04 |
108.4 |
93.9-118.6 |
1:08 |
109.5 |
93.9-117.6 |
1:16 |
104.1 |
97.2-111.4 |
细胞培养上清稀释比例 |
平均期望值(%) |
范围(%) |
1:02 |
109.5 |
102.7-114.0 |
1:04 |
111.5 |
105.8-115.8 |
1:08 |
105.7 |
102.7-110.8 |
1:16 |
98.1 |
87.5-109. |
应用本试剂盒,检测若干健康志愿者的样本,志愿者的用药史不详。
样本类型 |
样本数目 |
平均值(pg/mL) |
样本值(pg/mL) |
血清 |
10 |
188 |
22-540 |
EDTA血浆 |
4 |
116 |
38-370 |
肝素血浆 |
3 |
208 |
180-241 |
细胞培养上清 |
10 |
n.d. |
n.d. |
n.d. 指样本浓度值低于检测范围内得3.5 pg/mL
本试剂盒识别天然和重组人趋化因子配体17。下述因子进行了特异性的评估,没有观察到明显的交叉反应和干扰影响。
Recombinant human: |
Recombinant mouse: |
6Ckine |
TARC |
MCP-1 |
|
MIP-1α |
|
MIP-1β |
|
RANTES |
|
TECK |
|
问题 |
造成原因 |
解决方法 |
标曲不好 |
移液量不准确 |
检查移液器,按时校准,仔细操作,充分混匀时盖紧管口并尽量避免泡沫。 |
稀释方法不恰当 |
||
显色值偏低 |
孵育时间太短 |
给予足够的孵育时间,样本和溶解的标准品隔夜后更换。 |
移液量不足或稀释不当 |
校准移液器和规范操作 |
|
CV偏高 |
酶标板清洗不当 |
使用正确的洗涤工序;如果使用洗板机,检查所有的端口是否堵塞。 |
受污染的洗液 |
准备新鲜洗液 |
|
灵敏度较低 |
试剂盒储存不当 |
按照产品组分表进行保存。 |