产品简介

 

本产品适用于从动物组织（肝脏、肾脏、脾脏、皮肤等）和细胞中提取总RNA。采用独特的磁珠及深度优化的缓冲体系有效捕获释放的核酸，提取的核酸纯度高，质量稳定可靠，提取的核酸适用于RT-PCR、Northern Blot、体外翻译、文库构建等实验。本产品配合自动化核酸提取仪器使用，可实现核酸的高通量提取。

 

组分信息

 

类别	组分编号	组分名称	18607ES16	18607ES48
Part Ⅰ	18607-A	96孔预装板	1块	1块×3
	18607-B	8联磁棒套	2条/包×1	2条/包×3
	18607-C	裂解液	8 mL	22 mL
Part Ⅱ	18607-D	DNase I	50μL	150 μL
	18607-E	DNase I Reaction Buffer (10×)	160μL	500 μL
	18607-F	PT液	80 μL	220 μL

 

储存条件

 

Part I组分室温保存，有效期1年。

Part II 组分-25～-15℃保存，有效期1年。

 

使用说明

 

1. PT液在-20℃中为冷冻状态，室温溶解后会有微量结晶，可涡旋混匀，待试剂完全溶解后使用。
2. 操作前请在裂解液中加入PT液至终浓度为1%，如1 mL裂解液中加入10 μL PT液，配制好的裂解液可在4℃保存一周。

搭配AP-16S 核酸提取仪自动化提取

1. DNA酶消化液配制：

1.1 常规样本，如肝脏，肾脏，脾脏和心脏等样本：10 μL 10 x buffer+3 μL DNaseⅠ+87μL DEPC水，轻柔吹打混匀，将配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暂存放于4℃（不超过30 min）。

1.2 微量样本，如微量脑组织：10 μL 10 x buffer + 0.3 μL DNaseⅠ+89.7μL DEPC水，轻柔吹打混匀，将配制完成的DNA酶消化液加入96深孔板中第4、10列或短暂存放于4℃（不超过30 min）。

2. 样本前处理：

2.1 组织样本：在离心管中加入450 μL裂解液，称取10-15 mg液氮研磨后的组织样本（肝脏及脾脏投入量小于10 mg），涡旋混匀，若有少量组织碎块可用移液枪进行吹打后，室温静置5 min得到样本裂解液。

2.2 悬浮细胞：取不超过500万细胞样本，1000rpm 4℃离心去除上清。在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。

2.3 贴壁细胞：使用胰酶将贴壁细胞进行消化并低速离心去除上清，在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。若细胞量小于1×10^6,，可直接去除孔板内培养基，向其中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到样本裂解液。

3. 取出预封装 96 深孔板，充分颠倒混匀，使用96孔板离心机短暂离心（或手甩），防止挂液。使用前小心撕去铝箔封口膜，防止液体溅出。
4. 将配制完成的DNA酶消化液加入到96深孔板中第4、10列。
5. 将处理好的样本裂解液加入样本处理孔（第1、7列）并吹打混匀3-5次。
6. 正确在提取仪中安放上述96孔预装板，并放置8联磁棒套。请按照下表进行程序设置并启动运行。程序结束后，洗脱孔（第5、11列）中的溶液即为核酸溶液。如需保存，可将其转移至干净的RNase-free离心管中，置于-80℃保存。

AP-16S自动核酸提取仪提取程序

步骤	第1步	第2步	第3步	第4步	第5步	第6步	第7步	第8步	第9步
工 位	3	1	2	3	4	6	5	5	3
等待时间	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:05:00	00:00:00	00:03:00	00:00:00	00:00:00
混合模式	3	2	3	3	5	3	3	3	3
混合时间	00:00:20	00:05:00	00:02:00	00:02:00	00:15:00	00:02:00	00:05:00	00:00:00	00:00:10
是否暂停	否	否	否	否	否	否	否	否	否
吸磁时间	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:00:45	00:00:00
体 积	700	1000	700	700	100	700	100	100	700
温 度	--	25	--	--	--	--	65	65	--

注：16通道仪器混合模式使用机器默认即可，不可与48通道机器混用程序。

AP-48N自动核酸提取仪提取程序

步骤	第1步	第2步	第3步	第4步	第5步	第6步	第7步	第8步	第9步
孔 位	3	1	2	3	4	6	5	5	3
等待时间	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:00:00	00:05:00	00:00:00	00:03:00	00:00:00	00:00:00
混合模式	2	1	2	2	3	2	2	2	2
混合时间	00:00:20	00:05:00	00:02:00	00:02:00	00:15:00	00:02:00	00:05:00	00:00:00	00:00:10
是否暂停	否	否	否	否	否	否	否	否	否
吸磁时间	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:01:30	00:00:45	00:00:45	00:00:45	00:00:00
体 积	700	1000	700	700	100	700	100	100	700
温 度	--	25	--	--	--	--	65	65	--

混合模式1：混合速度200000，混合时间10s；混合模式2：混合速度300000，混合时间10s；混合模式3：混合速度50，混合时间10s。

 

注意事项

 

1. 预装板组分如有析出或浑浊（尤其冬季等室温为低温环境时），可45℃加热至溶液澄清。

2. 洗脱时可能存在磁珠残留，吸取核酸时应尽量避免吸入磁珠。

3. 冻存样品避免反复冻融，否则会导致样品中核酸的质量下降。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。

5. 本产品仅作科研用途。

 

Ver.CN20240923