磁珠法 | 粪便悬液DNA提取
68
2026-04-22
实验所用试剂设备清单
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货号 |
产品名称 |
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MolPure® MagSoil/Stool DNA Kit |
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— |
无水乙醇 |
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16通道核酸提取仪 |
实验前准备
1．样本缓冲液和去蛋白液使用前需充分摇匀，去蛋白液需2~8℃保存。
操作步骤
1．进行样本前处理，加入200 μL粪便悬液样本至研磨管中，加入440 μL样本缓冲液；
2．加入160 μL样本裂解液，将研磨管置于涡旋振荡仪器上，高速涡旋10 min裂解样本。【注】：涡旋过程中应适当颠倒摇晃，防止样本沉在管底。
3．于70℃孵育10 min，孵育期间可短暂涡旋一次研磨管，使样本裂解充分。25℃ 14000 g离心1 min，转移全部上清至1.5 mL离心管。
4．加入300 μL去蛋白液，涡旋5 sec，置于-20℃冰箱5 min，然后立即25℃ 14000 g离心2 min，转移500 μL上清液至干净的1.5 mL离心管。【注】：去蛋白液使用前充分摇匀；加入去蛋白液后低温处理，更有利于去除杂质。
5．将瓶装试剂分装至96孔板对应的孔中，按如下表格分装：
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列 |
名称 |
试剂名称 |
投入量 |
备注 |
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1/7 |
结合 |
结合液 |
500µL |
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2/8 |
漂洗1 |
洗涤液A |
600µL |
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3/9 |
漂洗2 |
洗涤液B |
250µL |
磁珠加入前充分混匀 |
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4/10 |
漂洗3 |
洗涤液C+磁珠 |
600µL+20µL磁珠 |
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5/11 |
洗脱 |
洗脱液 |
70µL |
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6/12 |
漂洗4 |
洗涤液C |
600µL |
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6．转移500 µL步骤4所得上清，至1/7列对应孔位中。
7．把磁棒套插到仪器中，把板子放到仪器（16通道核酸提取仪）相应位置。启动程序。
8．程序结束后，将洗脱孔（5/11列）中的洗脱液转移至新的离心管中，溶液可置于-20℃短期保存，-80℃长期保存。
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步骤 |
工位 |
等待时间 (min) |
混合模式 |
混合时间 |
是否暂停 |
吸磁时间 (min) |
体积 (μL) |
温度 |
|
第1步 |
4 |
0 |
3 |
30 s |
否 |
1min |
600 μL |
- |
|
第2步 |
1 |
0 |
2 |
10 min |
否 |
1min30s |
1000 μL |
- |
|
第3步 |
2 |
0 |
3 |
2 min |
否 |
30s |
600 μL |
- |
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第4步 |
3 |
0 |
1 |
5 min |
否 |
30s |
250 μL |
- |
|
第5步 |
4 |
0 |
3 |
2 min |
否 |
30s |
600 μL |
- |
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第6步 |
6 |
0 |
3 |
1 min 30 s |
否 |
30s |
600 μL |
- |
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第7步 |
5 |
2 min |
4 |
6 min |
否 |
1min30s |
70 μL |
65℃ |
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第8步 |
6 |
0 |
3 |
10 s |
否 |
0 |
600 μL |
- |
混合模式1：混合速度100000 10s
混合模式2：混合速度200000 10s
混合模式3：混合速度300000 10s
混合模式4：混合速度400000 10s
质检结果—DNA浓度和纯度
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样本序号 |
浓度（nanodrop）ng/μL |
A260/A280 |
A260/A230 |
Qubit（ng/μL） |
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1 |
116.786 |
1.650 |
1.210 |
42.8 |
|
2 |
271.953 |
1.750 |
1.560 |
47.8 |
|
3 |
372.205 |
1.720 |
1.210 |
270 |
|
4 |
177.272 |
1.680 |
1.130 |
54.6 |
|
5 |
304.277 |
1.690 |
1.710 |
215 |
|
6 |
306.448 |
1.700 |
1.380 |
212 |
质检结果—DNA完整度分析
实验结论
采用翌圣生物磁珠法土壤/粪便DNA提取试剂盒（18526ES）提取6个粪便样本，通过Nanodrop检测DNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整度，结果显示：提取的粪便DNA浓度高，纯度较好，能够满足后续16S测序的质量标准。
