vero细胞磁珠法RNA提取
5615
2026-01-28
实验所用试剂清单
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货号 |
产品名称 |
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MolPure® Magnetic Tissue Total RNA Kit |
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Surface RNase Remover (with Spray Bottle) |
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Trypsin-EDTA (0.25%), no phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），无酚红 |
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— |
无水乙醇 |
实验前准备
1.洗涤液B在使用按照标签说明加入对应无水乙醇。
2.在裂解液中加入PT液至终浓度为1%。
3.DNA酶消化液配制：
操作步骤
1. 使用胰酶（40123ES）将贴壁细胞（细胞数量1×106）进行消化并低速离心去除上清，在离心管中加入450 μL裂解液吹打混匀，室温静置5 min，得到前处理样本。
2. 在前处理样本中加入550 μL结合液，涡旋5s混匀。
3. 加入20 μL磁珠悬浮液，涡旋5s混匀，置于室温旋转仪混匀5 min。
4.
孵育结束后短暂离心，将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
（该步骤会出现磁珠结块的现象，属于正常现象，因为核酸含量太高）
5. 向离心管中加入700 μL洗涤液A，充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
6. 向离心管中加入700 μL洗涤液B，充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
7. 短暂离心弃去残留液体，置于磁力架中开盖室温晾干5 min，确保磁珠无乙醇残留。
8. 向离心管中加入100μL DNA酶消化液，轻柔颠倒或吹打使磁珠分散，室温放置15 min，每隔5 min颠倒混匀1次。
（加入100μL DNA酶消化后，磁珠结块现象消失，因为核酸浓度降低）
9. 向离心管中加入700 μL洗涤液B，充分涡旋混匀2 min，然后将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，小心吸弃液体。
10. 重复步骤9。
11. 瞬离吸干净残留液体，置于磁力架中开盖室温放置5min使乙醇充分挥发。
12. 向离心管中加入100 μL洗脱液，置于恒温震荡仪中，60℃ 1600 rpm震荡混匀5 min。将离心管放置于磁力架上，直至磁珠完全吸附后，将洗脱液转移至无RNA酶的离心管中。核酸溶液保存于-80℃。
质检结果—RNA浓度和纯度
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样本序号 |
浓度（nanodrop）ng/μL |
A260/A280 |
A260/A230 |
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1 |
211.34 |
1.96 |
1.81 |
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2 |
231.31 |
1.96 |
1.91 |
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3 |
187.02 |
2.0 |
2.3 |
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4 |
212.12 |
1.98 |
2.31 |
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5 |
243.19 |
2.02 |
1.91 |
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6 |
227.41 |
2.02 |
1.90 |
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7 |
298.62 |
2.0 |
1.96 |
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8 |
200.08 |
1.99 |
1.96 |
质检结果—RNA完整度分析
实验结论
采用翌圣生物磁珠法组织细胞RNA提取试剂盒（18605ES）提取8个vero细胞样本，每个样本细胞数量在100万左右，通过Nanodrop检测RNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整度，结果显示：提取的RNA浓度满足预期要求、纯度好、完整度好。
数据来源：美国某高校老师
