产品简介

Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒（柱式）可以快速地将DNA样品中的未甲基化胞嘧啶转化成尿嘧啶而甲基化胞嘧啶维持不变，双链DNA经过高温亚硫酸氢盐处理后，双链DNA解链变成单链，在HSO₃^-作用下，导致胞嘧啶残基发生脱氨基反应并将它们转化为尿嘧啶，甲基化修饰的残基保持不变。进而在后续PCR扩增过程中，尿嘧啶会被胸腺嘧啶(T)取代。转化反应时间仅需5 min；DNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。

 

产品信息

货号	12225ES10/12225ES50
规格	10T/50T

 

组分信息

组分编号	组分名称	12225ES10	12225ES50
12225-A	转化液	2 mL/瓶×1	3.3 mL/瓶×3
12225-B	洗涤液	1.1 mL/瓶×1	5.5 mL/瓶×1
12225-C	脱硫液	2.2 mL/瓶×1	11 mL/瓶×1
12225-D	洗脱液	500 μL/管×1	1.5 mL管×1
12225-E	纯化柱	10个	50个
12225-F	收集管	10个	50个

注：10T/盒：向洗涤液中加入4.4 mL的无水乙醇；

50T/盒：向洗涤液中加入22 mL的无水乙醇；

加入无水乙醇后，颠倒混匀后备用，此时应将瓶盖拧紧，防止乙醇挥发影响试剂使用效果。

 

储存条件  

12225-A转化液室温避光保存，其他组分室温保存，有效期12个月。

 

注意事项

1. 为保证下游实验的顺利进行，进行转化步骤时，应对投入的DNA总量进行精确定量，推荐使用Qubit3.0/4.0对投入DNA进行定量，且A260 / A280比值在1.7 - 1.9之间；
2. DNA投入量范围100 pg-2 μg，最佳投入量为100 ng - 1 μg，过低不利于下游检测，过高可能导致回收率/转化效率降低。
3. 转化液/脱硫液/洗涤液中含有挥发性组分，使用完毕后，应及时拧紧瓶盖，室温储存。
4. 转化后样本，应及时进行下游实验，若短暂储存，可置于-20℃，长期储存可置于-80℃。
5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
6. 本产品仅作科研用途！

 

使用说明

试剂及耗材准备：1.5 mL的无菌离心管，无菌枪头，无核酶水，无水乙醇，PCR管；

50. 亚硫酸氢盐转化：

1. 根据需要实验的样本数量，准备相应的无菌PCR管，并按照下表要求配制反应体系：
2. 转化体系

组分	体积
投入DNA	100 pg-2 μg
转化液	180 μL
ddH2O	Up to 150 μL
总体积	200 μL

用移液器将上述体系吹打混匀或短暂涡旋混匀5 s，短暂离心，将反应液离心至PCR管底部。

5. 注意：1. 此时PCR管中反应液总体积为200 μL，为使转化更充分，应在步骤2）吹打混匀后，将反应液等分，转移至新的无菌PCR管中，运行转化程序。转化结束后，将两个PCR管中的反应液合并至同一个纯化柱中进行纯化。

2. 如果样本体积在 20-40 μL 之间，则减少转化液的体积，总体积保持200 μL。
3. 如果样本体积为50 μL，则转化液加入150 μL，总体积保持200 μL，转化时间延长至6 min以上。

3）CT转化程序设置

温度	时间
98 ℃	5 min
4 ℃	∞

将PCR管置于预设好程序的PCR仪上，进行上述反应。

50. 转化产物纯化

1. 准备好相应样本个数的纯化柱套件，将200 μL的转化后的反应液转移至纯化柱中，13000 g离心30-60 s，丢弃滤液，将纯化柱重新放于收集管中；
2. 向纯化柱中加入100 μL的洗涤液（确认已经添加无水乙醇），13000 g离心30-60s，丢弃滤液，将纯化柱重新放于收集管中；
3. 向纯化柱中加入200 μL的脱硫液，于室温中静置反应20 min，反应结束后13000 g离心30-60 s，丢弃滤液，将纯化柱重新放于收集管中；
4. 向纯化柱中加入200 μL的洗涤液，13000 g离心30-60s，丢弃滤液，将纯化柱重新放于收集管中；
5. 重复步骤4）一次；
6. 将纯化柱转移至准备好的1.5 mL的离心管中，开盖晾干后，加入10-30 μL的洗脱液至滤膜中央，室温静置1min后，13000 g离心1 min，收集洗脱液；
7. 将洗脱后的样本置于-20 ℃暂存，若长期保存，请将样本置于-80 ℃保存，同时应避免不必要的反复冻融。

注：纯化后转化产物可直接用于后续PCR反应或测序流程。

 

Ver.CN20240222