Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit DNA超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)

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COA

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产品简介

Hieff® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit超快速DNA亚硫酸氢盐转化试剂盒(柱式)可以快速地将DNA样品中的未甲基化胞嘧啶转化成尿嘧啶而甲基化胞嘧啶维持不变双链DNA经过高温亚硫酸氢盐处理后,双链DNA解链变成单链,在HSO3-作用下,导致胞嘧啶残基发生脱氨基反应并将它们转化为尿嘧啶,甲基化修饰的残基保持不变。进而在后续PCR扩增过程中,尿嘧啶会被胸腺嘧啶(T)取代。转化反应时间5 minDNA投入量范围100 pg-2 μg; 未甲基化的胞嘧啶转化效率≥99%。转化后的产物适用于PCR扩增和NGS测序等下游应用。

 

产品信息

货号

12225ES10/12225ES50

规格

10T/50T

 

组分信息

组分编号

组分名称

12225ES10

12225ES50

12225-A

转化液

2 mL/瓶×1

3.3 mL/瓶×3

12225-B

洗涤液

1.1 mL/瓶×1

5.5 mL/瓶×1

12225-C

脱硫液

2.2 mL/瓶×1

11 mL/瓶×1

12225-D

洗脱液

500 μL/管×1

1.5 mL管×1

12225-E

纯化柱

10个

50个

12225-F

收集管

10个

50个

注:10T/盒:向洗涤液中加入4.4 mL的无水乙醇;

50T/盒:向洗涤液中加入22 mL的无水乙醇;

加入无水乙醇后,颠倒混匀后备用,此时应将瓶盖拧紧,防止乙醇挥发影响试剂使用效果。

 

储存条件  

12225-A转化液室温避光保存,其他组分室温保存,有效期12个月。

 

注意事项

  1. 为保证下游实验的顺利进行,进行转化步骤时,应对投入的DNA总量进行精确定量,推荐使用Qubit3.0/4.0对投入DNA进行定量,且A260 / A280比值在1.7 - 1.9之间;
  2. DNA投入量范围100 pg-2 μg最佳投入量为100 ng - 1 μg,过低不利于下游检测,过高可能导致回收率/转化效率降低。
  3. 转化液/脱硫液/洗涤液中含有挥发性组分,使用完毕后,应及时拧紧瓶盖,室温储存。
  4. 转化后样本,应及时进行下游实验,若短暂储存,可置于-20℃,长期储存可置于-80℃。
  5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
  6. 本产品仅作科研用途!

 

使用说明

试剂及耗材准备:1.5 mL的无菌离心管,无菌枪头,无核酶水,无水乙醇,PCR管;

  1. 亚硫酸氢盐转化:
  1. 根据需要实验的样本数量,准备相应的无菌PCR管,并按照下表要求配制反应体系:
  2. 转化体系

组分

体积

投入DNA

100 pg-2 μg

转化液

180 μL

ddH2O

Up to 150 μL

总体积

200 μL

用移液器将上述体系吹打混匀或短暂涡旋混匀5 s,短暂离心,将反应液离心至PCR管底部。

  1. 注意:1. 此时PCR管中反应液总体积为200 μL,为使转化更充分,应在步骤2)吹打混匀后,将反应液等分,转移至新的无菌PCR管中,运行转化程序。转化结束后,将两个PCR管中的反应液合并至同一个纯化柱中进行纯化。
  1. 如果样本体积在 20-40 μL 之间,则减少转化液的体积,总体积保持200 μL
  2. 如果样本体积为50 μL,则转化液加入150 μL,总体积保持200 μL,转化时间延长至6 min以上

3)CT转化程序设置

温度

时间

98 ℃

5 min

4 ℃

PCR管置于预设好程序的PCR仪上,进行上述反应。

  1. 转化产物纯化
  1. 准备好相应样本个数的纯化柱套件,将200 μL的转化后的反应液转移至纯化柱中,13000 g离心30-60 s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  2. 向纯化柱中加入100 μL的洗涤液(确认已经添加无水乙醇),13000 g离心30-60s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  3. 向纯化柱中加入200 μL的脱硫液,于室温中静置反应20 min,反应结束后13000 g离心30-60 s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  4. 向纯化柱中加入200 μL的洗涤液13000 g离心30-60s,丢弃滤液,将纯化柱重新放于收集管中;
  5. 重复步骤4)一次;
  6. 将纯化柱转移至准备好的1.5 mL的离心管中,开盖晾干后,加入10-30 μL的洗脱液至滤膜中央,室温静置1min后,13000 g离心1 min,收集洗脱液;
  7. 将洗脱后的样本置于-20 ℃暂存,若长期保存,请将样本置于-80 ℃保存,同时应避免不必要的反复冻融。

注:纯化后转化产物可直接用于后续PCR反应或测序流程。

 

Ver.CN20240222

 

 

 

400-6111-883