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翌圣带您了解IHC实验流程

免疫组织化学(Immunohistochemistry, IHC)是一种实验技术,用于检测组织切片中特定抗原(通常是蛋白质)的存在和定位。该技术广泛应用于医学研究、病理诊断和生物学研究中。

 

IHC的基本原理是利用抗原-抗体反应的特异性。抗体是能够特异性识别和结合抗原的蛋白质。当抗体与组织切片中的相应抗原结合后,通过检测抗体上的标记物(如酶、荧光染料或金属颗粒)的信号,可以在显微镜下观察到抗原的位置和表达水平。

 

翌圣生物IHC全系列产品为您的IHC实验保驾护航,助您获取文献级IHC图像的旅途一帆风顺。今天,小翌带您详细了解下我们为您的IHC实验中关键步骤所准备的试剂及注意点,助您完美躲坑。

 

 

组织固定和切片

实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类,前者包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片,后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法,对于组织形态保存好,且能作连续切片,有利于各种染色对照观察;还能长期存档,供回顾性研究;石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响,但可进行抗原修复。冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度,然后进行切片的方法,因其制作过程较石蜡切片快捷、简便,而多应用于手术中的快速病理诊断。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

60535ES

10%中性福尔马林溶液

100 mL/500 mL

45/135

60536ES

4%多聚甲醛固定液

100 mL/500 mL

55/195

36309ES

OCT冰冻切片包埋剂

118 mL

218

 

 

烤片、脱蜡及水化

将切片放置与56~60℃的恒温箱中2~6小时,将带有蜡的组织切片牢固的黏在载玻片上,一面染色过程中切片脱落。使用二甲苯浸泡样品,脱掉组织中的蜡,但是由于进入组织中的二甲苯不能与水溶性染色液相容,需要使用梯度的乙醇将组织中的二甲苯逐步替代出来。

货号

名称

规格

目录价(元)

60722ES

Dewaxing Agent 环保浸蜡脱蜡剂

500 mL

325

 

 

抗原修复

细胞或组织用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后,会导致蛋白之间的交联(cross-link),从而遮蔽样品的抗原位点,导致免疫染色时染色信号减弱,甚至出现一些假阳性染色结果。很多抗原的可视性可以通过抗原修复来提高,抗原修复可以打破福尔马林固定时形成的蛋白质交联,从而使被掩藏的抗原显现出。

 

推荐使用柠檬酸缓冲液高温高压抗原修复法,其效果优于微博修复发和直接煮沸修复法,使得免疫组化结果更加可靠。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

36319ES

Improved Antigen Retrieval Buffer(50X Citrate Sodium Buffer,pH 6.0)

改进型柠檬酸钠抗原修复液(50X)

100 mL

165

 

 

细胞膜打孔

当目标抗原位于细胞内部时,为了使抗体能够进入细胞内部,必须通过通透液暂时破坏细胞膜的完整性,使其变得通透。使用通透液有助于暴露抗原、核酸等作用靶点,使抗体、探针或标记物等更容易进入细胞内,从而确保染色等的检测效果。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

36317ES

免疫染色通透液(Triton X-100)

100 mL/500 mL

55/175

 

 

阻断内源性过氧化物酶活性

内源性过氧化物酶广泛存在于一些细胞和组织中,包括血红细胞、肾脏和肝脏组织等。从而导致利用过氧化物酶的方法进行样品检测时会出现较高的背景,甚至出现假阳性结果。因此,细胞或组织样品等在染色前宜使用适当的过氧化物酶封闭液进行封闭,以消除内源性过氧化物酶的干扰。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

36322ES

内源性过氧化物酶封闭液

100 mL/500 mL

65/245

 

 

背景封闭

抗体能被组织切片中富有电荷的胶原和结缔组织成分吸附,从而导致背景着色,为了防止这种现象发生,最好在特异性抗体处理切片之前进行封闭,来降低背景染色和假阳性染色。我司给您准备好了各种动物的正常血清以及即用型封闭液。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

36116ES

Normal donkey serum 正常驴血清

10 mL

800

36117ES

Normal rabbit serum 正常兔血清

5 mL

280

36118ES

Normal mouse serum正常小鼠血清

5 mL

704

36119ES

Normal goat serum 正常山羊血清

10 mL

800

36320ES

Immunostaining Blocking Buffer 免疫染色封闭液

100 mL/500 mL

225/955

 

 

抗原抗体结合

抗体的选择,选择已通过验证可用于免疫组化(IHC)应用的一抗,来识别靶点;即可选择直接带有偶联物的一抗又可以利用普通的一抗识别靶点,然后再利用带有偶联物的二抗进行识别一抗。

选择抗体需要确认一下重要信息。

 

一抗:

1. Antigen(抗原名称):英文全称、简称都提供, 中文最好也提供

2. Reactivity(反应性):实验用于什么物种, 是人, 大鼠还是小鼠等

3. Applications(应用):已通过验证可用于免疫组化(IHC)。

 

二抗:

1. Host(一抗名称,种属来源)

2. Conjugate(标记物):抗体是酶标记还是荧光标记,还是其他。

 

 

另外小翌还为您准备了免疫组化笔(Cat#36310),可帮您在不影响实验结果的前提下有效减少抗原抗体的使用量,并避免表面试剂流失造成的干片、脱片。

 

若您使用的是生物素标记的二抗,还需要添加辣根过氧化物酶标记链霉亲和素(HRP-Streptavidin)后再显色。

 

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货号

名称

规格

目录价(元)

33101ES

Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit lgG(H+L)

过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(H+L)

100 μL

195

33102ES

Alkaline Phosphatase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG

碱性磷酸酶标记山羊抗兔IgG(H+L)

100 μL

298

33103ES

Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG(H+L)

生物素标记山羊抗兔IgG(H+L)

100 μL

228

33201ES

Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)

过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)

100 μL

195

33202ES

Alkaline Phosphatase AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)

碱性磷酸酶标记山羊抗小鼠IgG(H+L)

100 μL

298

33203ES

Biotin-SP AffiniPure Goat Anti-Mouse IgG(H+L)

生物素标记山羊抗小鼠IgG(H+L)

100 μL

228

36310ES

ImmHis™ Hydrophobic Barrier Pen ImmHis™ 免疫组化笔(疏水屏障)

1支

562

35105ES

HRP Streptavidin 辣根过氧化物酶标记链霉亲和素

100 μL

436

35103ES

YSFluorTM 488-conjugated Streptavidin

YSFluorTM 488标记链霉亲和素

100 μL

436

35104ES

YSFluorTM 647-conjugated Streptavidin

YSFluorTM 647标记链霉亲和素

100 μL

418

35105ES

YSFluorTM594-conjugated Streptavidin

YSFluorTM 594标记链霉亲和素

100 μL

418

36321ES

Primary & Secondary Antibody Diluent for Immunohistochemistry

免疫组化用一抗二抗稀释液

100 mL/500 mL

255/995

更多抗体产品欢迎进入官网选购:https://www.yeasen.com/products/max/241

 

 

显色

显色是免疫组化染色的最后关键步骤,小翌给您准备了4款不同颜色的显示试剂盒,适用于不同显色系统,给您的图像标上您想要的颜色。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

36301ES

BCIP/NBT Alkaline Phosphatase(AP) Substrate Kit for IHC

BCIP/NBT显色试剂盒(蓝紫色,IHC)

1 Kit

397

36302ES

DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC(Yellow Color)

DAB显色试剂盒黄色(IHC)

1 Kit

295

36303ES

DAB Peroxidase Substrate Kit for IHC(Blue Color) DAB

显色试剂盒蓝色(IHC)

1 Kit

295

36304ES

AEC Peroxidase Substrate Kit for IHC(Red Color)

AEC显色试剂盒红色(IHC)

1 Kit

187

 

 

复染及封片

为使组织切片清晰的显示组织结构,便于准确定位,常对切片进行复染,最常使用的细胞核染料为苏木精。最后使用封片剂保存您的辛苦劳作,DAB染色最后使用中性树脂封固,如果选用AEC染色,最后通常使用水性封片剂封片。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

60502ES

Hematoxylin Stain Solution 苏木素染色液

50 mL/100 mL/500 mL

135/240/680

36313ES

Neutral Balsam,Mounting Medium for Microscopy

中性树胶(镜检用永久封片剂)

100 mL

156

36307ES

Fluoromount-G™抗荧光淬灭封片剂(水溶性)

5 mL/25 mL

146/556

36308ES

DAPI Fluoromount-G™ 抗荧光淬灭封片剂(含DAPI,水溶性)

4 mL/20 mL

156/636

 

以上就是IHC实验的全流程攻略啦,小翌还想偷偷告诉您,为了让您有更好的操作体验,我们为您准备了免疫组化试剂盒,包含以上操作所需的所有试剂(您只需准备好您要检测的一抗即可),让您的实验不仅结果好,而且省心。

 

产品详情

货号

名称

规格

目录价(元)

36311ES

Immunohischemistry Kit for Mouse Primary Antibody

小鼠免疫组化(IHC)检测试剂盒

100T

1256

36312ES

Immunohischemistry Kit for Rabbit Primary Antibody

兔免疫组化(IHC)检测试剂盒

100T

1186

 

400-6111-883