细胞分选是指根据细胞所具有的特性把某种特定的细胞亚群从混合的细胞样品中分离出来的一种技术,它是对某一特定细胞进行生化分析和功能分析的前提和基础。
表1. 常见细胞分选技术对比
常见细胞分选技术 |
分选结果 |
安全性 |
其他 |
细胞磁性分选技术 |
1、适宜进行单Marker分选 2、分选纯度好,得率高 3、分选对细胞无损,尤其适用于免疫细胞分选 |
1、纳米级磁珠安全、可靠,无需额外去除 2、微米级别磁珠需要额外去除 |
1、不需要昂贵的设备、操作简单 2、科研级、临床级磁珠可选 |
流式细胞分选技术 |
1、多Marker分选,纯度高,得率好 2、传统流式分选:高压高速对细胞冲击较大,细胞受损严重 |
1、容易交叉污染 2、带荧光抗体使用存在争论 |
1、设备昂贵、操作难度较大,需要专门操作人员进行操作和数据分析 |
基于细胞密度的离心分选技术 |
1、回收率较差 2、无法分选获得特定细胞亚群 |
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1、药用级Ficoll液 |
由上表可知,细胞磁性分选技术由于其简单快捷的操作,分选细胞纯度好、得率高、活性好等特点,已成为目前使用最广泛的细胞分选技术,同时搭配纳米级磁珠(生物可降解基质,无需额外去除),可实现对所需细胞更安全、可靠的分选。
细胞磁性分选技术可进行阳性、阴性细胞分选。阳性细胞分选一般搭配有柱分离(阳选抗体磁珠一步标记),阴性细胞分选一般搭配无柱分离(阴选抗体加磁珠两步标记)。
表2. 阳性细胞分选、阴性细胞分选对比
细胞分选技术 |
阳性细胞分选(有柱分离) |
阴性细胞分选(无柱分离) |
磁珠粒径 |
粒径<100 nm的磁珠 |
粒径250 nm~4.5 μm的磁珠 |
磁珠标记细胞 |
阳性抗体磁珠(带一种需要细胞表面标识抗体的磁珠)加入细胞悬液孵育,磁珠标记需要的细胞。 |
生物素标记抗体Cocktail(所有不需要细胞的表面标识抗体)加入细胞悬液中孵育,链霉亲和素磁珠再加入细胞悬液孵育,磁珠标记所有不需要的细胞。 |
细胞分选 |
分离柱进磁铁,加入磁珠标记细胞,加缓冲液洗出非标记细胞,分离柱取出磁铁,用活塞析出磁珠标记细胞。 |
磁珠标记细胞的试管入磁铁,并孵育,倒出非标记细胞,即为所需细胞。 |
优点 |
分选细胞纯度高、特异性高, 所需磁珠用量少。 |
需要的细胞未经标记。 |
缺点 |
可能会对细胞产生一定的激活作用 |
需要知道所有不需要细胞的表面标识抗体,磁珠用量多,特异性稍差。 |
翌圣生物拥有高性能单克隆抗体研发平台,凭借其丰富的抗体和磁珠等开发经验,全力开发推出细胞分选产品,提供高质量的分选磁珠、耗材及设备,满足客户的研发和生产需求。目前已上新针对人免疫细胞的科研级CD3、CD4、CD8阳性分选磁珠,后续产品持续开发中。
表3. 翌圣分选磁珠系列产品选购指南
产品货号 |
37601ES |
37605ES |
37609ES |
中文名称 |
人CD3分选磁珠 |
人CD4分选磁珠 |
人CD8分选磁珠 |
基质 |
葡聚糖纳米磁珠 |
葡聚糖纳米磁珠 |
葡聚糖纳米磁珠 |
配体 |
Anti-CD3 antibody
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Anti-CD4 antibody
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Anti-CD8 antibody
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粒径 |
50-100 nm |
50-100 nm |
50-100 nm |
规格 |
2 mL |
2 mL |
2 mL |
分选能力 |
Up to 1×109 cells |
Up to 1×109 cells |
Up to 1×109 cells |
储存缓冲液 |
1 X PBS (pH7.2-7.4) containing 2 mM EDTA, 0.5% BSA buffer without Ca2+ |
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有效期 |
2~8℃避光保存,有效期6个月,严禁冻存。 |
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安全性高:磁珠粒径与进口竞品等同,低毒。
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效 果 好:纯度高、活性高、回收率高。
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操作方便:生物可降解基质、无需额外去除。
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质 量 高:稳定性高、兼容性高。
纯度、活性、回收率测试:
图1. 翌圣CD3、CD4、CD8分选磁珠和进口竞品富集免疫细胞的纯度和回收率对比图
备注:分别使用翌圣CD3、CD4、CD8分选磁珠与竞品磁珠对PBMC样本中的T细胞(细胞总量:1×107 )进行富集,通过流式检测分选得到的细胞组分中 CD3、CD4、CD8 T细胞纯度,并计算比较 CD3、CD4、CD8 T细胞的回收率。
产品名称 |
货号 |
规格 |
分选能力 |
目录价/元 |
Human CD3 Nanobeads 人CD3分选磁珠 |
2 mL |
Up to 1×109 cells |
5685 |
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Human CD4 Nanobeads 人CD4分选磁珠 |
2 mL |
Up to 1×109 cells |
5685 |
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Human CD8 Nanobeads 人CD8分选磁珠 |
2 mL |
Up to 1×109 cells |
5685 |
以上磁珠,我司均可提供测试装规格100 μL(分选能力:Up to 5×107 cells),可在翌圣商城免费领取,或联系当地销售申请。
产品名称 |
货号 |
规格 |
目录价/元 |
Lymphocyte Separation Medium 1.077 淋巴细胞分离液1.077 |
100 mL/5×100mL |
219/989 |
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Lymphocyte Separation Medium 1.084 淋巴细胞分离液1.084 |
100 mL |
546 |
对应流式抗体详见专题:CD分子流式抗体选购指南